Skip to content

Uraz zwiększa funkcję TLR2 i ekspresję peptydów przeciwdrobnoustrojowych poprzez mechanizm zależny od witaminy D czesc 4

3 miesiące ago

215 words

Jednakże postawiliśmy hipotezę, że poprzez włączenie 25D3 w hodowli w stężeniu podobnym do występującego w skórze normalnej, indukowana przez TGF-P 1. Indukcja CYP27B1 może następnie doprowadzić do wytworzenia 1,25D3 i późniejszej indukcji katelicydyny, CD14 i TLR2. . Ani sam 25D3, ani TGF-pi nie wpływały na ekspresję; jednakże ich jednoczesny dodatek indukował katelicydynę, CD14 i TLR2 (Figura 4). Specyficzne hamowanie CYP27B1 przez itrakonazol lub dodanie antagonisty VDR ZK159222, blokowało ten efekt (Figura 4). Te dane pokazują zatem, że działanie TGF-pi i 25D3 było spowodowane enzymatycznym wytwarzaniem 1,25D3. Figura 4 TGF-P1 prowadzi do zwiększenia liczby genów reagujących na rany 1,25D3 na skutek aktywacji CYP27B1. Keratynocyty traktowano uprzednio antagonistą VDR ZK159222 (VAZ, 10-7M) lub antagonistą CYP27B1 itrakonazolem (ITRA; 10-7MM), a następnie stymulowano TGF-P (1 ng / ml) w obecności lub przy braku 25D3. (10 nM) przez 24 godziny. Ekspresję mRNA katelicydyny (A), CD14 (B) i TLR2 (C) określono w sposób opisany na fig. 2. Indukcja tych genów odporności i genów odpowiedzi odpornościowej za pomocą TGF-pi znalezionego w ranach zależała od dostępności 25D3. oraz aktywność CYP27B1 lub funkcjonalnego VDR. Dane są średnie. SD pojedynczego doświadczenia przeprowadzonego w trzech egzemplarzach i są reprezentatywne dla 3 niezależnych doświadczeń. * P <0,05, ** P <0,01, test końcowy ucznia. Wywołanie funkcji immunologicznej regulowanej przez witaminę D3 w ranach skóry odbywa się za pośrednictwem aktywacji CYP27B1 in vivo. W celu dalszego zbadania znaczenia zwiększonej aktywacji CYP27B1 w uszkodzeniu skóry, rany myszy pozbawionych enzymu CYP27B1 oceniano pod kątem indukcji wrodzonej odpowiedzi immunologicznej. CD14 jest regulowany przez 1,25D3 (29), a w przypadku myszy, CD14 indukowano u zwierząt dzikich, ale nie u tych, które nie miały CYP27B1 (Figura 5A). Przeciwnie, mysi Camp, który nie jest regulowany przez 1,25D3 (7), był zwiększony w ranach zarówno u zwierząt dzikich, jak i u zwierząt z niedoborem CYB27B1 (Figura 5B). Dane te podkreślają znaczenie aktywowanej 1,12D3 aktywowanej przez CYP27B1 indukcji wywoływanej witaminą D3 reakcji odpornościowej w uszkodzeniu skóry. Figura 5 Aktywacja CYP27B1 odpowiada za zwiększoną sygnalizację witaminy D3 w ranach. Rany od CYP27B1. /. Myszy i dobrane pod względem wieku myszy z miotu typu dzikiego 24 godziny po sterylnym nacięciu skóry pełnej grubości oceniano pod względem ekspresji wrodzonego rozpoznawania odpowiedzi immunologicznej i cząsteczek odpowiedzi (n = 5 na grupę). Objętość transkryptu w zranionej skórze mierzono za pomocą qPCR i normalizowano do skóry nieuszkodzonej od tego samego zwierzęcia. (A) Wzrost CD14 u zwierząt dzikich po urazie, ale nie u myszy bez CYP27B1. (B) Katelicydyna była indukowana w ranach zarówno z typu dzikiego, jak iz CYP27B1 (3). Zwierząt. Chociaż indukcja katelicydyną była mniejsza w CYP27B1. /. myszy, różnica nie była statystycznie istotna. * P <0,05, ** P <0,01 względem kontrolnej, nieuszkodzonej skóry, test Manna-Whitneya. 1,25D3 wzmacnia funkcję TLR2 / 6 przez keratynocyty. W celu zbadania funkcjonalnej istotności indukcji TLR2 i CD14 przez zwiększenie 1,25D3, keratynocyty poddano działaniu kilku ligandów TLR, a odpowiedź przeciwdrobnoustrojową zmierzono przez ocenę ekspresji katelicydyny. W przeciwieństwie do komórek hodowanych w warunkach podstawowych, keratynocyty traktowane wcześniej niskimi dawkami 1,25D3 (0,1 nM przez 24 godziny) reagowały na Malp-2, ale nie na innych agonistów TLR, takich jak LPS, CpG, lipopeptyd 19-kDa i flagellina ( Figura 6A). Oprócz Malp-2, inne ligandy heterodimeru TLR2 / 6, takie jak składnik ściany komórkowej grzybów, zymosan i syntetyczna lipoproteina FSL-1, były również zdolne do indukowania katelicydyny po aktywacji keratynocytów przez 1,25D3 (100 nM; Figura 6B). ). Przy niskich stężeniach 1,25D3 (0,1 nM) znaczenie zwiększonej reaktywności stało się jeszcze bardziej widoczne, o czym świadczy zależne od dawki zwiększenie ekspresji katelicydyny do 60 razy większe niż obserwowane w komórkach bez 1,25D3 (Figura 6C). Figura 6 Funkcja TLR2 w keratynocytach jest zwiększona o 1,25D3. (A) Aby przetestować znaczenie funkcjonalne zwiększonej ekspresji TLR2 i CD14 w keratynocytach eksponowanych na 1,25D3, komórki inkubowano z małą dawką 1,25D3 (0,1 nM przez 24 godziny), a następnie stymulowano ligandami TLR dla dodatkowe 24 godziny. Obfitość mRNA katelicydyny mierzono jak na Figurze 2. Jedynie ligand TLR2 / 6 Malp-2 zwiększał ekspresję powyżej tego indukowanego przez samą małą dawkę 1,25D3. (B) Reakcja zależna od dawki ekspresji katelicydyny po podaniu agonistów TLP2 / 6 Malp-2, FSL-1 lub zymosanu we wskazanych stężeniach w obecności 1,25D3 (100 nM) [więcej w: pzhgp nowa sól, czy można żyć bez trzustki, dieta po operacji ginekologicznej ] [więcej w: czy można żyć bez trzustki, projekt ustawy o zdrowiu publicznym, apteka hygea zielona góra ]