Skip to content

Uraz zwiększa funkcję TLR2 i ekspresję peptydów przeciwdrobnoustrojowych poprzez mechanizm zależny od witaminy D cd

2 miesiące ago

161 words

Skóra potraktowana miejscowym 1,25D3 również wykazywała zwiększoną ekspresję białka w TLR2 i katelicydynę. Ten wzrost TLR2 obserwowany u pacjentów po pojedynczym podaniu 1,25D3 nie był związany z klinicznymi lub histologicznymi objawami zapalenia. Dlatego te obserwacje pokazują, że 1,25D3 indukuje TLR2 w keratynocytach in vitro i in vivo oraz że ten sam zestaw elementów rozpoznawania i odpowiedzi odporności wrodzonej jest indukowany zarówno przez 1,25D3 jak i przez uszkodzenie. Figura 2 Wpływ 1,25D3 na ekspresję TLR w hodowanych keratynocytach. (A) Ekspresję mRNA TLR2 i CD14 zwiększono o 1,25D3 (100 nM) w hodowanych monowarstwach keratynocytów po 24 godzinach. (B) Ekspresję białka TLR2 i CD14 zwiększono o 1,25D3 (100 nM) w jednowarstwowych ekstraktach keratynocytów ocenianych metodą Western blot i oznaczono ilościowo analizą gęstości obrazu. (C) Keratynocyty hodowane w zróżnicowanych konstruktach naskórkowych stymulowanych 1,25D3 (100 nM) również wykazywały wzrost obfitości transkryptu CD14 i TLR2. Dane są średnie. SD reprezentatywnego doświadczenia przeprowadzonego w trzech powtórzeniach. * P <0,05, ** P <0,01, test końcowy ucznia. (D) Skórę od zdrowych ochotników (n = 7) leczono dawką 1,25D3 (1,0 mM nakładaną raz). Kontrole są skórą przeciwległą leczoną pojazdem. Po 4 dniach uzyskano biopsję dziurkowania z obu miejsc, a skrawki skóry wybarwiono na ekspresję TLR2. Intensywność barwienia. stopniowane zgodnie z intensywnością immunoreaktywności (0, brak ekspresji, 3, silne wyrażenie). zwiększone u pacjentów leczonych miejscowo 1,25D3, jak określił badacz ślepy na grupę leczoną. Wyświetlane są sekcje od reprezentatywnego uczestnika badania. * P <0,05, test Manna-Whitneya. CYP27B1 jest indukowany przez uszkodzenie i przez czynniki rozpuszczalne występujące w ranach. Stwierdzenie, że geny wyrażone w urazie były takie same jak te wywołane przez 1,25D3 sugerowało, że istnieje mechanizm w ranach, który prowadzi do wzrostu dostępnego 1,25D3. Aby przetestować tę hipotezę, zbadaliśmy następnie, czy zranienie lub czynniki rozpuszczalne obecne w ranie wpływają na CYP27B1, enzym odpowiedzialny za przekształcenie nieaktywnego 25D3 w aktywny 1,25D3. Ekspresja tego ważnego enzymu po uszkodzeniu skóry była dotychczas nieznana, ale wcześniejsze obserwacje potwierdzają tę hipotezę: w skórze większość witaminy D3 jest przechowywana w nieaktywnym proformie, 7-dehydrocholesterolu (23) i niektórych mediatorach zapalnych takich jak jako TNF-a i IFN-y wpływać na metabolizm 1,25D3 w monocytach i makrofagach (24-26), jak również w nieróżnicowanych keratynocytach (27, 28). W ludzkiej skórze ekspresja CYP27B1 wzrosła po zranieniu (Figura 3A). Hodowane keratynocyty eksponowane na TGF-pi również wykazywały wzrost ekspresji CYP27B1, podczas gdy TNF-a. nie miało żadnego efektu (rysunek 3B). Podobnie, jak obserwacje wykonane w monocytach (4), ekspresję CYP27B1 w keratynocytach można indukować przez aktywację TLR2 (Figura 3C). Dane te wykazały, że uszkodzenie prowadzi do wzrostu ekspresji enzymu zdolnego do indukowania lokalnego wzrostu w 1,25D3. Ta indukcja może wystąpić wtórnie do aktywności czynników obecnych w ranie, takich jak IFN-y. lub TGF-pi, lub przez mikrobiologiczną stymulację TLR2. Figura 3CYP27B1 jest zwiększona w odpowiedzi na uszkodzenie, TGF-pi lub aktywację TLR2. (A) Ekspresję CYP27B1, która przekształca nieaktywny 25D3 w aktywny 1,25D3, oceniano w ranach skóry jak na Figurze 1. Zraniona skóra (n = 5) zwiększała mRNA CYP27B1 w porównaniu z kontrolą (n = 4). * P <0,05, test Manna-Whitneya. (B) Keratynocyty hodowano w obecności TNF-a. (20 ng / ml) lub TGF-pi (1 ug / ml) przez 24 godziny, po czym wyizolowano RNA i analizowano obfitość transkryptu CYP27B1 za pomocą qPCR. (C) Keratynocyty hodowano z różnymi ligandami TLR przez 24 godziny, po czym ekspresję CYP27B1 analizowano jak opisano powyżej. Zarówno TGF-pi jak i ligand TLR2 Malp-2 indukowały ekspresję CYP27B1. Lipopeptyd 19-kDa, 19-kDa; LTA, kwas lipotejchojowy. Dane są średnie. SD pojedynczego doświadczenia przeprowadzonego w trzech egzemplarzach i są reprezentatywne dla 3 niezależnych doświadczeń. * P <0,05, ** P <0,01, test końcowy ucznia. TGF-P indukuje katelicydynę, CD14 i TLR2 przez zależną od CYP27B1 aktywację 1,25D3. Aby bezpośrednio sprawdzić, czy stymulacja CYP27B1 jest odpowiedzialna za indukcję wrodzonych cząsteczek immunologicznych obserwowanych w ranach, keratynocyty były następnie eksponowane na TGF-P w obecności 25D3. Wcześniejsze badania z TGF-P 1, a także kilkoma innymi cząsteczkami związanymi z naprawą rany, nie wykazały, że te czynniki mogą regulować ekspresję katelicydyny (11) [hasła pokrewne: uporczywy kaszel przyczyny, zaburzenia afektywne dwubiegunowe, apteka hygea zielona góra ] [przypisy: lotowanie gołębiami młodymi, pzhgp nowa sól, szpital na traugutta wrocław ]