Skip to content

Uraz zwiększa funkcję TLR2 i ekspresję peptydów przeciwdrobnoustrojowych poprzez mechanizm zależny od witaminy D ad 5

2 miesiące ago

119 words

Ekspresja mRNA katelicydyny w keratynocytach inkubowanych z małą dawką 1,25D3 (0,1 nM) lub wysokim stężeniem wapnia (1,7 mM) przez 24 godziny, a następnie stymulowana za pomocą Malp-2 przez kolejne 24 godziny. (D) Organotypowe naskórkowe konstrukty stymulowano za pomocą Malp-2 (0,1 ug / ml) samego lub w obecności 1,25D3 (100 nM), a ekspresję peptydu katelicydyny oznaczano przez barwienie immunologiczne. Konstrukty wybarwiono poliklonalnym przeciwciałem anty-LL-37 (zielonym), a jądra wykryto za pomocą DAPI (niebieski). Oryginalne powiększenie, × 400. (E) Ekspresję mRNA katelicydyny hamowano przez neutralizujące przeciwciało TLR2 nanoszone na keratynocyty stymulowane za pomocą Malp-2 lub FSL-1 w obecności 1,25D3 (100 nM). Dane są średnie. SD pojedynczego doświadczenia przeprowadzonego w trzech egzemplarzach i są reprezentatywne dla 3 niezależnych doświadczeń. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, Test końcowy ucznia. W celu zbadania, czy ta zwiększona reakcja na ligandy TLR2 / 6 odzwierciedla bezpośrednie działanie 1,25D3 na funkcję TLR2 lub efekt pośredni związany ze zmianami w różnicowaniu keratynocytu wywołanymi przez 1,25D3, keratynocyty badano po różnicowaniu wywołanym przez rozwarstwienie przy interfejs powietrze-ciecz lub przez zwiększenie stężenia wapnia pozakomórkowego. Hodowane monowarstwy keratynocytów inkubowane z wysokim stężeniem wapnia (1,7 mM) jako alternatywnym sygnałem indukującym końcowe różnicowanie nie reagowały na aktywację TLR2 / 6 przez Malp-2 (Figura 6C). To leczenie skutecznie stymulowało różnicowanie, co widać po zwiększonej ekspresji mimucyny i zmienionej morfologii komórek (dane nie pokazane). Podobnie, zróżnicowane keratynocyty w konstruktach naskórka nie reagowały na Malp-2 w nieobecności 1,25D3, ale wystąpiły po jego dodaniu (Figura 6D). Odpowiedź na Malp-2 była spowodowana przez TLR2, ponieważ neutralizujące przeciwciało przeciwko TLR2 zablokowało odpowiedź zależną od 1,25D3 zarówno na Malp-2, jak i FSL-1 (Figura 6E). Ponadto, na poparcie bezpośredniego działania 1,25D3 na funkcję TLR2 obserwowano odpowiedź transkrypcyjną ludzkiego promotora genu katelicydyny na Malp-2. Keratynocyty transfekowano konstruktami promotora CAMP, w tym jeden z ukierunkowanym zakłóceniem CAMP VDRE. W obecności 1,25D3 aktywność promotora reagowała na Malp-2 tylko w konstruktach, które obejmowały VDRE (Figura 7A). Ponadto hamowanie VDR za pomocą ZK159222 hamowało zdolność Malp-2 do stymulowania wzrostu mRNA katelicydyny (Figura 7B). Zatem, 1,25D3 zarówno indukuje samą katelicydynę, jak i umożliwia TLR2 dalsze zwiększenie ekspresji tego AMP. Figura 7 Aktywacja TLR2 aktywuje indukcję katelicydyny przez szlak witaminy D3. (A) Funkcjonalny VDRE był wymagany do transkrypcyjnej aktywacji katelicydyny przez Malp-2 i 1,25D3. Keratynocyty HaCaT zawierające konstrukty reporterowe promotora katelicydyny (pGL3 500) traktowano Malp-2 (0,1 ug / ml) w obecności lub nieobecności 1,25D3 (100 nM). Konstrukty promotorowe z usuniętym VDRE w pozycji 619 bp do <633 bp (pGL3 1500. VDRE) utraciły aktywność transkrypcyjną we wszystkich doświadczeniach. Wartości reprezentują stosunek pomiędzy działaniem świetlika a działaniem lucyferazy Renilla. (B) Ponadto leczenie keratynocytów antagonistą VDR ZK159222 (10. 7 M) blokowało indukowaną przez Malp-2. Katelicydynę. Dane są średnie. SD pojedynczego doświadczenia przeprowadzonego w trzech egzemplarzach i są reprezentatywne dla 3 niezależnych doświadczeń. * P <0,05, test ucznia. Dyskusja Wounding tworzy naruszenie w nienaruszonej fizycznie i chemicznie skórnej barierze przeciw zewnętrznej otoczce. Krótko po wytworzeniu rany komórki nabłonkowe zostają aktywowane, wytwarzają wiele czynników, które chronią przed inwazją bakterii, i uruchamiają rekrutację leukocytów, aby dodatkowo bronić rany. Te nabyte na bazie nabłonka cząsteczki obejmują AMP, enzymy, cytokiny i czynniki wzrostu, które inicjują złożony i nie do końca poznany proces naprawy. Dopiero po kilku godzinach do kilku dni keratynocyty od krawędzi rany zaczynają migrować i ponownie uwalniają zranienie, przywracając skuteczną barierę fizyczną. Przed ostatecznym utworzeniem tej bariery ważne jest, aby unikalny mikromilieu rany chronił gospodarza przed infekcją. Wykazano, że kateplicyna AMP ma zasadnicze znaczenie dla tego procesu (18), ale zgodnie z naszą wiedzą elementy odpowiedzialne za kontrolę ekspresji podczas urazu nie były wcześniej znane. Niedawno stwierdzono, że 1,25D3 indukuje ludzką ekspresję CAMP w keratynocytach in vitro i in vivo (6. 8), a obserwowany wzrost ekspresji katelicydyny po napromieniowaniu UVB został zaproponowany jako spowodowany wzrostem o 1,25D3 (30). [przypisy: apteka hygea zielona góra, czy można żyć bez trzustki, dieta po operacji ginekologicznej ] [podobne: zaburzenia afektywne dwubiegunowe, jak dobrze wypaść na rozmowie o pracę, szpital okulistyczny poznań ]