Skip to content

Rozdzielczość łuszczycy po zablokowaniu aktywności biologicznej IL-15 w modelu myszy heteroprzeszczepu ad 8

4 tygodnie ago

817 words

Jest to również potwierdzone przez dane in vitro, w których mAb 146B7 hamowało indukowaną IL-15 (3 proliferację limfocytów T i TNF-a. wytwarzanie przez komórki jednojądrzaste i odwróconą ochroną, w której pośredniczy IL-15. przeciwko apoptozie monocytów (Figura 2). Proponujemy, aby cechy biologiczne przeciwciała 146B7 miały duże znaczenie w uzyskaniu tych wyników terapeutycznych w tkance ksenogenicznej łuszczycowej. IL-15R obecny na limfocytach T składa się z unikatowej łańcucha-., IL-15Ra, który ma bardzo wysokie powinowactwo do IL-15 (KD 10. 11 M) i ma łańcuch p i łańcuch. IL-2R (2, 36). Łańcuch y jest kluczowy dla wiązania IL-15, podczas gdy łańcuchy a i P są niezbędne do procesów przekazywania sygnałów. Wytworzyliśmy dwa typy przeciwciał anty-IL-15, z których oba hamowały indukowane przez IL-15B efekty biologiczne za pomocą różnych sposobów działania. Przeciwciało 404E4 reprezentuje klasyczne przeciwciało hamujące, które współzawodniczy z IL-15R. do wiązania z IL-15 (Figura 1a). To przeciwciało okazało się najmniej skuteczne w hamowaniu działania indukowanego IL-15 (3 (Figura 2a). Przeciwciało 146B7 działa jednak poprzez inny tryb działania i silnie hamuje aktywność, w której pośredniczy IL-15B, bez zakłócania IL-15-IL-15R. wiązanie (rysunek 1a i b). To przeciwciało wiąże się z IL-15, gdy jest związane z receptorem i wydaje się, że efektywnie blokuje aktywność biologiczną (tj. Hamowanie indukowanej przez IL-15B proliferacji komórek T [Figura 1c] i wytwarzanie TNF-a [Figura 1d] przez zakłócanie z montażem IL-15R .,. i. elementy sygnalizacyjne (rysunek 3a). Różnica między wartościami IC50 mAb 146B7 i 404E4 obserwowanymi w eksperymentach hamowania proliferacji, biorąc pod uwagę, że ich powinowactwo do IL-15 jest porównywalne (Figura 1c), są zgodne z ich sugerowanymi trybami działania. IL-15 wiąże się z IL-15R. łańcuch o wysokim powinowactwie (KD 10. 11 M) i przeciwciało blokujące receptor, takie jak 404E4, musi zatem wykazywać wysokie powinowactwo lub być stosowane w bardzo wysokich stężeniach, aby było skuteczne. Przeciwciało 146B7 może działać silniej, ponieważ nie musi konkurować z IL-15 o IL-15R. wiążące i tylko musi ingerować w IL-15R. montaż. Hipotezę tę potwierdzają eksperymenty, w których wykazano, że mAb 146B7 jest znacznie bardziej skuteczny w hamowaniu działania indukowanego IL-15 (3 (Figura 1c). W tym doświadczeniu przeciwciała były wstępnie inkubowane z IL-15, zanim zostały dodane do komórek. W innym typie eksperymentu, w którym IL-15 dodano do komórek przed dodaniem przeciwciał, mAb 404E4 nie blokował indukowanej IL-15. proliferacji w stężeniach aż do 10 .g / ml, podczas gdy mAb 146B7 skutecznie hamował przy podobnym IC50. (3,1-0, 0,9 nM) jak w doświadczeniach, w których mAb 146B7 preinkubowano z IL-15. Najnowsza praca Dubois i wsp. (40) dostarczył nowy wgląd w mechanizm działania IL-15. Artykuł ten elegancko pokazuje, że tworzenie IL-15 / IL-15R. kompleksy na powierzchni komórek umożliwiają transendosomalny recykling IL-15, prowadząc do utrzymywania się IL-15 związanej z powierzchnią (Figura 7a). Wysokie powinowactwo IL-15R. w przypadku IL-15, w połączeniu z obserwacją, że ta cytokina jest trudna do wykrycia w płynach ustrojowych (40), sugeruje, że większość IL-15 w organizmie to IL-15R. granica. The Dubois i in. (40) papier wykazał, że IL-15 / IL-15R. kompleksy są zdolne do indukowania sygnalizacji tran przez komórki eksprymujące IL-15R. i. -chains (Figura 7c). Można oczekiwać, że przeciwciało, takie jak mAb 146B7, blokujące przekazywanie sygnału przez łańcuch a, będzie skutecznie hamować przekazywanie sygnału w cis, jak również w trans (do sąsiednich komórek eksprymujących a- i p-fu) [Figura 7d i e]). Ponadto zasugerowano, że IL-15 związana w błonie nieskompleksowana z IL-15Ra, a zatem niewrażliwa na wymywanie kwasem przy pH 4,4, istnieje (31,41, 42). Nie było pewności, w jaki sposób ta forma IL-15 wyrażanej na powierzchni jest przyłączona do membrany. Aby zbadać, czy mAb 146B7 wiąże się z niewrażliwą na kwasy IL-15 związaną z błoną, przeprowadziliśmy cytometrię przepływową z mAb 146B7 i 404E4 na monocytach stymulowanych LPS i IFN – a, traktowanych lub nietraktowanych buforem octanowym o pH 4,4 ( nie pokazany). Zarówno monocyty traktowane kwasem, jak i nieotwierane barwiono podobnie z mAb 146B7, co wskazuje, że to przeciwciało rozpoznaje membranę IL-15. Interesujące jest jednak to, że nie obserwowano barwienia powierzchni z mAb 404E4, podczas gdy to przeciwciało silnie zabarwiło stymulowane LPS i IFN-a monocyty po permeabilizacji. Ponieważ mAb 404E4 wiąże się z IL-15R. miejsce wiązania na IL-15, ten wynik silnie sugeruje, że IL-15 błonowe zdefiniowane przez Bulfone-Paus et al. (41) jest skompleksowany z IL-15R, a leczenie przy pH 4,4 nie może przerwać tej interakcji
[patrz też: olej kokosowy wybielanie zębów, zielnik hodowcy, amc esk ]
[patrz też: lotowanie gołębiami młodymi, pzhgp nowa sól, szpital na traugutta wrocław ]