Skip to content

Rozdzielczość łuszczycy po zablokowaniu aktywności biologicznej IL-15 w modelu myszy heteroprzeszczepu ad 6

1 miesiąc ago

451 words

Postawiliśmy hipotezę, że mAb 146B7 przeszkadza w montażu. sygnalizujący kompleks receptora. Aby rozwiązać ten problem, zbadaliśmy epitop wiążący mAb 146B7 i 404E4 stosując zmutowane białka IL-15 opisane przez Pettit i in. (34). Mutanty te mają substytucje w miejscach IL-15, które są ważne albo dla interakcji łańcucha ., albo dla obu oddziaływań p-i i łańcucha p IL-15 (zmutowany Q108S: glutamina [Gln] przy reszcie 108 został zastąpiony przez serynę [ Ser], mutacja w miejscu interakcji łańcucha ., zmutowany D8SQ108S: Gin na reszcie 108 został zastąpiony przez Ser, a kwas asparaginowy [Asp] w pozycji 8 zastąpiono Ser, mutacje w obu interakcjach łańcucha. miejsca IL-15). mAb 146B7 nie wiązało się z żadnym z tych zmutowanych białek IL-15, co wskazuje, że mAb 146B7 rozpoznaje epitop zaangażowany w interakcję z łańcuchem y15-15R (Figura 3a). Przeciwnie, mAb 404E4 skutecznie wiąże się z obydwoma zmutowanymi białkami (Figura 3b). Te obserwacje potwierdzają wiązanie mAb 146B7 w celu zakłócania montażu IL-15R. i jego łańcuch-. Figura 3 Swoista specyficzność ludzkich przeciwciał anty-IL-15. mAb 146B7 (a) i mAb 404E4 (b) badano na wiązanie z ludzką IL-15 (wypełnione kwadraty), mutant IL-15 Q108S (wypełnione odwrócone trójkąty, Gln na reszcie 108 zastąpiono Ser; mutacja w. – miejsce interakcji łańcucha) i zmutowany D8SQ108S (wypełnione trójkąty, Gin na reszcie 108 zastąpiono Ser, a Asp w pozycji 8 zastąpiono mutacjami Ser w obu miejscach interakcji p i P łańcucha IL-15 z jego receptorem) (34). Przeciwciało 146B7 zmniejsza ostrość łuszczycy w modelu heteroprzeszczepu mysiego SCID myszy ludzkiej łuszczycy. Ekspresję IL-15 w skórze ludzkiej łuszczycy zbadano przez immunobarwienie przy użyciu mAb 146B7 i mysiego przeciwciała przeciw ludzkiej IL-15 (m112). Wyraźne barwienie cytoplazmatyczne komórek epidermalnych (keratynocytów) obserwowano dla przeciwciał swoistych wobec IL-15 p, podczas gdy tkanka zdrowa wykazywała o wiele mniejszą intensywność dodatni IL-15 (dane nie pokazane). Aby zbadać rolę IL-15 w patofizjologii łuszczycy, przetestowaliśmy skuteczność swoistego dla IL-15 p mAb 146B7 w leczeniu przeszczepów skóry ludzkiej łuszczycy przeszczepionych myszom SCID (30, 35, 38, 39). Model ten został uprzednio zwalidowany i wykazano, że ludzkie przeszczepy łuszczycowe mogą być z powodzeniem przeszczepione myszom SCID, zachowując kliniczną, lekką mikroskopijną i immunohistochemiczną charakterystykę łuszczycową skóry w porównaniu ze skórą wstępnie przesiedloną (38). Ślepa kliniczna ocena przeszczepów skóry została przeprowadzona przed pierwszą iniekcją i tydzień po ostatniej iniekcji i oceniona pod względem ostrości łuszczenia, stwardnienia i rumienia w skali od 0 do 3. Porównanie wszystkich czterech przeprowadzonych eksperymentów wskazało to traktowanie mAb 146B7 skutkowało zmniejszeniem ogólnego wyniku klinicznego (<1,1. 0,2) ksenoprzeszczepów w porównaniu z myszami kontrolnymi traktowanymi PBS (<0,6. 0,2; P = 0,15). Charakterystyka mikroskopowa biopsji ksenogenicznych uzyskanych od myszy kontrolnych, którym wstrzyknięto PBS, zachowała charakterystyczny fenotyp skóry łuszczycowej, w tym hiperkeratozę, parakeratozę, akantozę z wydłużonymi pałeczkami rete, wyraźny naciek komórek jednojądrzastych (ryc. 4, górny panel) i zwiększoną liczbę kolagenowych keratynocytów mierzonych jako Ki-67 + keratynocyty (wskaźnik proliferacji keratynocytów) (Figura 4, dolny panel). W przeciwieństwie do tego, ksenoprzeszczepy z myszy, które były leczone mAb 146B7 raz w tygodniu przez 2 tygodnie, skutkowały prawie całkowitym ustąpieniem cech łuszczycy (Figura 4, górny panel), w tym normalizacji liczby keratynocytów cyklicznych (Figura 4, dolny panel). Cyklosporyna A (CsA), silny lek przeciwłuszczycowy o zademonstrowanej skuteczności w tym modelu (30, 35, 38, 39), została włączona jako kontrola pozytywna. Leczenie CsA co drugi dzień w ciągu 2 tygodni spowodowało również osłabienie łuszczycy, chociaż nie w tym samym stopniu co mAb 146B7 (Figura 4) w tych warunkach eksperymentalnych. Figura 4mAb 146B7 skutecznie łagodzi łuszczycę w modelu heteroprzeszczepu mysiego SCID myszy. Myszy SCID wszczepiane ludzką skórą łuszczycową traktowano ip PBS, mAb 146B7 lub CsA. Przeszczepy skóry zebrano po obróbce, zatopiono w parafinie i wybarwiono H & E (górne panele) lub antygenem jądrowym Ki-67 (dolne panele). Pokazane próbki tkanki pochodzą od tego samego pacjenta i są reprezentatywnymi eksperymentami ze skórą łuszczycową otrzymaną od czterech różnych pacjentów. W celu ilościowego oznaczenia danych immunohistochemicznych pokazanych na ryc. 4, zmierzono grubość naskórka, liczbę komórek zapalnych w górnej skórze właściwej, liczbę keratynocytów ketonowych Ki-67 + i stopnie parakeratozy [hasła pokrewne: lotowanie gołębiami młodymi, olej kokosowy wybielanie zębów, karmienie gołębi pocztowych ] [hasła pokrewne: testy osobowości psychologia, amc esk, gołębniki świata ]