Skip to content

Rozdzielczość łuszczycy po zablokowaniu aktywności biologicznej IL-15 w modelu myszy heteroprzeszczepu ad 5

1 miesiąc ago

318 words

Ten eksperyment powtórzono dwa razy, uzyskując podobne wyniki. (b) zależne od dawki wiązanie biotynylowanego mAb 146B7 (wypełnione kwadraty) do IL-15 związanego z komórkami chłoniaka Raji wyrażającymi IL-15R. wykazano za pomocą cytometrii przepływowej. Jako kontrolę stosowano poliklonalne huIgG1 (puste kwadraty). Ten eksperyment powtórzono pięć razy, uzyskując podobne wyniki. MFI, średnia intensywność fluorescencji. (c) Wpływ mAb 146B7 na proliferację indukowaną IL-15a. Ludzkie PBMC inkubowano z IL-15 (12,5 ng / ml) w połączeniu z mAb 146B7 (wypełnione kwadraty), mAb 404E4 (wypełnione odwrócone trójkąty) lub huIgG1 (puste kwadraty) przez 72 godziny. Inkorporację BrdU mierzono w celu oznaczenia proliferacji. Przedstawiono reprezentatywne dane z 9 indywidualnych eksperymentów. (d) mAb 146B7 hamuje IL-15. ale nie indukowane IL-2a TNF-a produkcja. Ludzkie PBMC inkubowano z IL-15 (0, 25, 100 ng / ml) lub z IL-2 (100 ng / ml) w połączeniu z mAb 146B7 w różnych stężeniach przez 72 godziny. Ilości TNF-a wyprodukowane zostały zmierzone za pomocą testu ELISA. Przedstawiono reprezentatywny eksperyment z serii 11 eksperymentów. Zbadaliśmy wiązanie mAb 146B7 do kompleksu IL-15 / IL-15R bardziej szczegółowo przy użyciu komórek Raji wyrażających IL-15R. (37). Wstępna inkubacja komórek Raji z IL-15 spowodowała zależne od dawki wiązanie mAb 146B7 z tymi komórkami (Figura 1b). Również wstępna inkubacja ludzkich monocytów z IL-15 ułatwiła zależne od dawki wiązanie mAb 146B7 (dane nie przedstawione, n = 3). mAb 146B7 hamuje proliferację limfocytów T i TNF-a. produkcja indukowana przez IL-15, ale nie IL-2. IL-15 wyzwala proliferację komórek T, jak również indukcję TNF-a produkcja monocytów. Oceniliśmy skuteczność mAb 146B7 i 404E4 na te efekty indukowane IL-15a. Zarówno mAb 404E4 jak i 146B7 hamowały proliferację limfocytów T indukowanych IL-15 ((Figura 1c), jeśli przeciwciała były preinkubowane z IL-15 przed dodaniem do komórek. Niekompletne mAb 146B7 okazało się zauważalnie silniejsze w hamowaniu proliferacji indukowanej przez IL-15 ((IC50 <1 .g / ml) niż mAb 404E4 (IC50 ~ 7 .g / ml). Żadne z przeciwciał swoistych wobec IL15A nie wpłynęło na proliferację komórek T indukowaną IL-2 ((danych nie pokazano). Następnie testowaliśmy wpływ mAb 146B7 na TNF-a indukowany przez IL-15 (3. produkcja przez PBMC. Przeciwciało 146B7 hamowało TNF-a indukowany przez IL-15 (3. wytwarzanie w sposób zależny od dawki, podczas gdy nie ma hamowania TNF-a pośredniczonego przez IL-2. obserwowano produkcję (rysunek 1d). Ponadto, IFN-y indukowany przez IL-15.. produkcja została zahamowana (dane nie pokazane, n = 3). mAb 146B7 indukuje apoptozę monocytów w hodowli PBMC. W celu zbadania, która populacja komórek była zablokowana przez hamowanie proliferacji indukowanej IL-15 (3 i TNF-a. wytwarzanie przez PBMC z mAb 146B7, badaliśmy indukcję apoptozy. Jak pokazano na Figurze 2aC, monocyty były bezpośrednio dotknięte, a mAb 146B7, w przeciwieństwie do kontrolnego przeciwciała przeciw KLH, silnie zwiększało frakcję apoptotycznych monocytów i zmniejszało frakcję żywych monocytów po 5 dniach hodowli w obecności IL. -15. Nie stwierdzono istotnych różnic w porównaniu do frakcji żywych i apoptotycznych komórek T (Figura 2d. F) i komórek B (nie pokazano); niewielki wzrost śmierci komórek obserwowano na komórkach NK (nie pokazano). Należy zauważyć, że liczba komórek T w hodowli PBMC w obecności IL-15 silnie wzrosła. Jednakże, ponieważ prawie wszystkie komórki T pozostały żywe w nieobecności lub obecności IL-15, nie widać różnic we frakcji komórek żywych lub apoptotycznych. Figura 2mAb 146B7 hamuje ochronę apoptozy przez IL-15. Ludzkie PBMC inkubowano z IL-15 (5 ng / ml) w samej pożywce hodowlanej (wypełnione kwadraty) lub w kombinacji z 10 (ig / ml mAb 146B7 (puste kółka) lub z 10 .g / ml przeciwciała kontrolnego izotypowo (wypełnione trójkąty ) Przez 5 dni. Apoptozę mierzono stosując aneksynę V skoniugowaną z FITC i PI. Żywe (a i d), wczesne (b i e) i późne (c i f) komórki apoptotyczne zdefiniowano odpowiednio przez aneksynę V-FITCnegPIneg, aneksynę V-FITCposPIneg i aneksynę V-FITCposPIpos za pomocą cytometrii przepływowej. Przedstawiono reprezentatywne dane z trzech indywidualnych doświadczeń z sześcioma różnymi dawcami PBMC. (a (cc) mAb 146B7 hamuje indukowane IL-15p monocyty. (d. f) Nie stwierdzono istotnych różnic w porównaniu do frakcji komórek T żywych i apoptotycznych. * P <0,05, mAb 146B7 w porównaniu do braku leczenia przeciwciałem. ** P <0,005, mAb 146B7 wobec braku leczenia przeciwciałem i mAb 146B7 w porównaniu z anty-KLH. Epitop przeciwciała 146B7 mapuje reszty IL-15 krytyczne dla wiązania łańcucha p IL-15R. Najsilniejsze hamowanie efektów związanych z IL-15. obserwowano w przypadku mAb 146B7, przeciwciała, które nie zakłóca wiązania IL-15 z IL-15Ra. [więcej w: amc esk, uporczywy kaszel przyczyny, szpital na traugutta wrocław ] [przypisy: magnetyczny rezonans jądrowy, karma dla owczarka niemieckiego, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego ]