Skip to content

Noworodkowe komórki NK celują w nabłonek kanału mysiego poprzez Nkg2d i powodują uszkodzenie tkanki w doświadczalnej atrezji dróg żółciowych czesc 4

1 miesiąc ago

110 words

Aby bardziej bezpośrednio zbadać, czy komórki NK są istotne dla uszkodzenia cholangiocytów wywołanego RRV in vivo, zbadaliśmy nabłonek dróg żółciowych i przebieg kliniczny myszy, którym wstrzyknięto RRV i pozbawiono komórek NK. Figura 5 Analiza cholangiocytów przez wątrobowe komórki NK. Średni (. SD) procent uwolnienia 51Cr przez mCl linii cholangiocytów mCl po 5 godzinach kokultury z wątrobowymi komórkami NK oczyszczonymi 7 dni po wstrzyknięciu soli fizjologicznej lub inokulacji RRV u jednodniowych myszy. Oś pozioma pokazuje stosunek komórek mCl (cel) do komórek NK (efektora). n = 3 dołki na grupę; wyniki są reprezentatywne dla 2 niezależnych eksperymentów, z wątrobowymi komórkami NK uzyskanymi z puli 10. 15 wątrób (* P <0,01); strzałki wskazują niewykrywalne komórki. Utrata komórek NK zapobiega uszkodzeniu nabłonka kanału po prowokacji RRV. Wstrzyknęliśmy sól fizjologiczną lub RRV myszom w ciągu 24 godzin od urodzenia, a następnie wstrzyknięto połowę myszy w każdej grupie 30 .l króliczej anty-surowicy anty-asialo GM1 (znane z zubożenia komórek NK, odnośnik 21) lub niespecyficznej surowicy króliczej (jako kontrolne) codziennie, począwszy od drugiego dnia życia i trwającego do dnia 12, a następnie co drugi dzień aż do dnia 21. Skuteczność wyczerpywania określono przez utratę ponad 97% komórek NK wątroby (definiowanych jako wzór wybarwienia DX5 + CD3a) po 1, 7 i 14 dniach (dane nie pokazane). Iniekcje były dobrze tolerowane, jak wykazano przez normalny wzrost powyżej 14 dni u myszy z wstrzykniętą solą fizjologiczną, otrzymujących komórkę anty-NK lub surowicę kontrolną. Zgodnie z oczekiwaniem, zakażenie RRV powodowało utrzymującą się żółtaczkę i 100% śmiertelność przez 15 dni życia u myszy otrzymujących surowicę kontrolną. Przeciwnie, utrata komórek NK zapobiegała wystąpieniu żółtaczki indukowanej RRV i acholicznych stolców u ponad 90% myszy (Figura 6A), umożliwiła normalny wzrost (Figura 6B) i promowała długoterminowe przeżycie w ponad 90% przypadków. myszy (Figura 6C). Figura 6 Ulepszone wyniki po inokulacji RRV u myszy zubożonych w komórki NK. Rozwój objawów (A), przyrost masy ciała (B) i przeżycie (C) noworodków myszy po podaniu soli fizjologicznej lub wstrzyknięciu RRV w pierwszym dniu życia. Myszom wstrzykiwano codziennie również surowicę zubożającą komórki NK lub surowicę kontrolną. Sól fizjologiczna, zubożone NK: n = 10; RRV, NK zubożone: n = 25; RRV, surowica kontrolna: n = 16; * P <0,001. Szczegółowe badanie mikroskopowe zewnątrzwątrobowych dróg żółciowych we wszystkich 4 grupach wykazało, że zubożenie komórek NK zapobiegało uszkodzeniu nabłonka przewodu, które zwykle występuje 3 dni po inokulacji RRV (Figura 7). Ponadto, myszy nie wykazały żadnych oznak zapalenia lub niedrożności dróg żółciowych w późniejszych punktach czasowych, utrzymując w ten sposób ciągłość światła przewodu żółciowego między wątrobą i dwunastnicą (Figura 7). Po rozpoczęciu iniekcji pod kątem zubożenia komórek NK opóźniono do dnia 5 po RRV (który następuje po wystąpieniu uszkodzenia nabłonka, ale przed całkowitą niedrożnością kanału), 67% myszy wykazywało niedrożność w pozawątrobowych przewodach żółciowych po 12-14 dniach; gdy opóźniono go do 7 dni (czas niedrożności przewodu i gdy myszy staną się żółtaczką), niedrożność wystąpiła u 100% myszy (Tabela 1). Brak istotnej histopatologii u myszy poddanych zubożeniu komórek NK w ciągu dnia po wstrzyknięciu RRV wystąpił pomimo faktu, że były podobne ilości RRV w tkankach 2 grup po 7 dniach (myszy zubożone w komórki NK: 1,8 x 106. 0,2 × 106 FFU / 100 mg tkanki wątroby w porównaniu do surowicy kontrolnej: 1,5 × 106. 0,3 × 106; P> 0,05). W rzeczywistości, podczas gdy myszy kontrolne usuwały wirus przez 14 dni, stwierdziliśmy, że miano wirusa wzrastało w wątrobie pozbawionej komórek NK o 14 dni (5,7 x 106. 2,3 x 106 FFU / 100 mg tkanki w porównaniu do braku wirusa wyizolowanego od myszy otrzymujących kontrolę serum). Co ciekawe, obecność RRV w wątrobach myszy zubożonych w komórki NK indukowała wątrobową ekspresję mRNA prozapalnych cytokin i chemokin do poziomów podobnych do (Ifng, IL12) lub łagodnie stłumionych (Cxcl9, Cxcl10) w porównaniu z tymi w surowicy kontrolnej. / Myszy, którym wstrzykiwano RRV, z wyraźną supresją genów wzbogaconych w komórki NK (Nkg2d, perforyna i granzymy; Figura 8). Podsumowując, dane te pokazują, że chociaż RRV może wyzwalać odpowiedź prozapalną niezależną od komórek NK, uszkodzenie nabłonka dróg żółciowych zależy od komórek NK. Ryc. 7 Zapobieganie urazom dróg żółciowych i niedrożności przez zubożenie komórek NK. Barwienie H & E podłużnych odcinków mysich pozawątrobowych dróg żółciowych w różnych punktach czasowych po podaniu soli fizjologicznej lub wstrzyknięciu RRV w pierwszym dniu życia; RRV, zubożone NK. grupie myszy wstrzyknięto również codziennie serum niszczące komórki NK (A). (B) Fotomikrografia po lewej jest obrazem o większym powiększeniu środkowego panelu w A pokazującym zapalną niedrożność kanału światła 7 dni po RRV, podczas gdy zdjęcie po prawej stronie pokazuje nienaruszony nabłonek i niezakłócony kanał światła 7 dni po Zakażenie RRV myszy zubożonej w komórkę NK
[podobne: uporczywy kaszel przyczyny, enrobioflox 10, magnetyczny rezonans jądrowy ]
[hasła pokrewne: zielnik hodowcy, karmienie gołębi pocztowych, lotowanie gołębiami młodymi ]