Skip to content

Noworodkowe komórki NK celują w nabłonek kanału mysiego poprzez Nkg2d i powodują uszkodzenie tkanki w doświadczalnej atrezji dróg żółciowych cd

2 tygodnie ago

844 words

Następnie, porównaliśmy populacje komórek jednojądrzastych po wstrzyknięciu RRV u myszy zubożonych w komórki CD4 + (opisywano wcześniej, rozwijając atrezę, odnośnik 9) i myszy zubożone w komórki CD8 + (wcześniej nie wykazano atrezji, odniesienie 9). W tych doświadczeniach ponownie zauważyliśmy, że myszy zubożone w komórki RR CD4 +, którym podawano RRV, rozwinęły niedrożność zewnątrzwątrobowych dróg żółciowych po 7 dniach, podczas gdy przewody myszy zubożonych w komórki CD8 + z niedoborem komórek CD8 + pozostały patentami. Wszystkie typy komórek zapalnych wzrosły po wstrzyknięciu RRV w obu grupach; jednakże, podczas gdy zubożone komórki CD4 + wątroby miały 5,5-krotny wzrost w komórkach NK, zubożenie komórek CD8 + zapobiegało temu wzrostowi i utrzymywało liczbę komórek NK podobnych do kontrolnych soli fizjologicznej (Figura 3B). Łącznie dane te wykazują preferencyjną populację wątroby przez aktywowane komórki NK w czasie niedrożności dróg żółciowych. Figura 3 Indukowana RRV aktywacja wątrobowych komórek NK po prowokacji RRV. (A) Histogramy cytometrii przepływowej pokazujące ekspresję Ifn ., Nkg2d, granzym B i perforiny przez wątrobowe komórki CD49b + (NK) w 5 i 7 dniu po RRV lub iniekcji soli fizjologicznej. Dla każdej poszczególnej cytokiny / proteazy liczba reprezentuje średnią intensywność fluorescencji indukowaną przez RRV minus mediana intensywności fluorescencji odpowiedniego kontrolnego roztworu soli. n = 3 wątki na grupę na punkt czasowy; % maksimum (oś pionowa) reprezentuje normalizację liczby zdarzeń w określonych ćwiartkach siatki cytometrii przepływowej. (B) Cytometrię przepływową komórek wątrobowych jednojądrzastych przedstawiono jako zmiany krotności inokulowanych RRV w stosunku do myszy kontrolnych z solą fizjologiczną, które zostały pozbawione komórek CD4 + lub CD8 + (komórki wyizolowane w 7 dni po wstrzyknięciu soli fizjologicznej lub RRV). n = 3. 4 dla każdej grupy; strzałki wskazują niewykrywalne komórki; oś pozioma pokazuje markery powierzchniowe identyfikujące określone typy komórek. Wybitna populacja zewnątrzwątrznych przewodów żółciowych noworodków przez komórki NK. Ponieważ pozawątrobowy przewód żółciowy jest głównym celem atrezji dróg żółciowych, określiliśmy ilościowo linie komórkowe w pozawątrobowych przewodach żółciowych (w tym woreczka żółciowego), jak opisano powyżej. Kanały pozawątrobowe u myszy kontrolnych miały prawidłową histologię, podczas gdy inokulacja RRV powodowała fenotyp atrezji dróg żółciowych u ponad 90% myszy, jak opisano wcześniej (8). Analiza metodą cytometrii przepływowej komórek jednojądrzastych izolowanych z puli kanałów pozawątrobowych 15. 20 zidentyfikowała komórki NK jako najbardziej obfite komórki zapalne w pierwszych 2 tygodniach życia myszy kontrolnych (Figura 4, A i B oraz Tabela uzupełniająca 1). Po inokulacji RRV, komórki NK dalej wzrastały i pozostawały najwyższe pod względem liczby ponad 10 razy w stosunku do innych komórek po 7 i 14 dniach. Porównanie populacji komórek jednojądrzastych po wstrzyknięciu RRV w komórce CD4 +. i myszy zubożone w komórki CD8 + (jak powyżej), stwierdziliśmy, że podczas gdy komórki NK wzrosły 38-krotnie w myszach zubożonych w komórki CD4 + w stosunku do kontroli, utrata komórek CD8 + zmniejszyła tę odpowiedź do zaledwie 4-krotnie w stosunku do kontroli w ciągu 7 dni. (Figura 4C). Tak więc, komórki NK są najczęściej występującymi komórkami zapalnymi zapełniającymi pozawątrobowe drogi żółciowe kontrolnych soli i myszy neonatalnych, którym wstrzyknięto RRV. Na podstawie tych danych i selektywnego wzrostu liczby komórek NK w kanałach pozawątrobowych poddawanych niedrożności indukowanej RRV (jak u myszy zubożonych w komórki CD4 +), postawiliśmy hipotezę, że komórki NK odgrywają kluczową rolę w patogenezie uszkodzenia dróg żółciowych. Rycina 4 Rozmieszczenie zewnątrzwątrobowej drogi żółciowej noworodków przez komórki zapalne po prowokacji RRV. Cytometryczne cytowanie przepływowe komórek jednojądrzastych wyizolowanych z pozawątrobowych przewodów żółciowych / pęcherzyków żółciowych poddanych mikrodyskl encji w 7 (A) i 14 (B) dni po podaniu soli fizjologicznej lub wstrzyknięciu RRV myszom jednodniowym. Oś pionowa pokazuje średnią liczbę komórek na przewód żółciowy. (C) Liczba komórek na przewód żółciowy jest pokazana jako zmiany krotności inokulowanej RRV w stosunku do myszy kontrolnych z solą fizjologiczną, które zostały pozbawione komórek CD4 + lub CD8 + (komórki wyizolowane w 7 dni po wstrzyknięciu soli fizjologicznej lub RRV). n = 15. 20 myszy na grupę i na punkt czasowy dla wszystkich eksperymentów; strzałki wskazują niewykrywalne komórki. Oś pozioma pokazuje markery powierzchniowe identyfikujące określone typy komórek. Uszkodzenie cholangiocytów przez komórki NK stymulowane RRV. Jako pierwszy krok do przetestowania tej hipotezy ustaliliśmy, czy wątrobowe komórki NK indukują lizę mysich linii cholangiocytów mCL w kokulturze (8, 9). Wąskie komórki NK z myszy, którym wstrzyknięto sól fizjologiczną (kontrola), nie uległy lizie mCl, ale komórki NK wątrobowe stymulowane przez RRV indukowały lizę w ciągu 5 godzin od hodowli, niezależnie od wcześniejszej ekspozycji mCL na RRV (Figura 5). Komórki NK stymulowane RRV wywoływały również podobną lizę mysiej linii hepatocytów (H2.35) i znacznie mniejszej ilości lizy komórek kontrolnych mysiego nabłonka płucnego (MLE-12) i raka sutka (4T1-MZ i 67-NR) (Suplementowa Figura 2). )
[więcej w: szpital na traugutta wrocław, zaburzenia afektywne dwubiegunowe, apteka hygea zielona góra ]
[podobne: amc esk, gołębniki świata, enrobioflox 10 ]