Skip to content

Noworodkowe komórki NK celują w nabłonek kanału mysiego poprzez Nkg2d i powodują uszkodzenie tkanki w doświadczalnej atrezji dróg żółciowych ad

2 tygodnie ago

514 words

Aby zbadać anatomiczną zależność między komórkami NK i drogami żółciowymi w ludzkiej atrezji dróg żółciowych, wybarwiliśmy 5-. M wycinki próbek z biopsji wątroby uzyskanych w momencie rozpoznania (1. 3 miesiące życia) z przeciwciałami przeciw CD56 (do wykrywania komórek NK ) i cytokeratyny (do wykrywania nabłonka przewodu żółciowego). Kontrole składały się z próbek pobranych z biopsji wątroby pobranych od dawców przeszczepów narządów w wieku 2. 3,5 roku; dobrane według wieku kontrole dawców od osób zdrowych nie były dostępne i nie były prowadzone z powodów etycznych. Sygnały immunofluorescencji zidentyfikowały kilka komórek NK wypełniających trakty portalu, albo w sąsiedztwie albo bezpośrednio zestawionych z komórkami nabłonkowymi, ale rzadko były obserwowane w kontrolach (Figura 1A). Ta populacja różniła się od komórek CD3 +, które również zapełniły przewód pokarmowy niemowląt z atrezją dróg żółciowych (Suplementowa Figura 1A, materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; doi: 10,1172 / JCI38879DS1). Poszukując wskazówek, czy anatomiczna zależność między komórkami NK a komórkami nabłonka przewodu ma znaczenie funkcjonalne, określiliśmy ilościową ekspresję mRNA w wątrobie dla genów zaangażowanych w aktywację komórek NK. Stwierdziliśmy, że ekspresja 8 z 10 genów zaangażowanych w cytotoksyczność i wszystkie 7 genów związanych z receptorem Nkg2d zwiększyły się 1,5- do około 500-krotnie w wątrobach niemowląt z atrekturą dróg żółciowych względem kontroli (Figura 1B). Spośród tych genów zwiększona ekspresja ekspresji wyrażona przede wszystkim po aktywacji (NCR2, CRTAM, SLAM, CD69 i KLRC2) sugeruje, że sygnatura molekularna reprezentuje stan funkcjonalny, a nie odbicie zwiększonej liczby komórek w traktach portalu (dodatkowa figura 1B). ). Uznając, że niektóre z tych genów mogą być również eksprymowane przez cytotoksyczne limfocyty T, które są zaangażowane w patogenezę atrezji dróg żółciowych, wykorzystaliśmy indukowany przez rotawirusy model atrezji dróg żółciowych w celu bezpośredniego określenia, czy komórki NK celują w nabłonek dróg żółciowych i indukują fenotyp choroby . Rycina 1Populacja i aktywacja komórek NK w wątrobach niemowląt z atreją dróg żółciowych. (A) Reprezentatywne sekcje wątroby od niedotkniętej kontroli i od niemowląt w momencie rozpoznania atrezji dróg żółciowych wybarwionych immunologicznie za pomocą antycytokeratyny (do wykrywania cholangiocytów, zielone, lewe panele) i anty-CD56 (do wykrywania komórek NK, czerwone, środkowe panele ) przeciwciała. Prawe panele reprezentują nakładki lewego i środkowego panelu po nuklearnym barwieniu kontrastowym z DAPI (niebieski). Groty strzałek wskazują komórki NK w przewodzie portalu; strzałki wskazują komórki NK zestawione z cholangiocytami; oryginalne powiększenie, × 400. (B) zmiana skórki mRNA w stosunku do kontroli dla genów kodujących receptory cytotoksyczne, markery aktywacji i geny związane z NKG2D w wątrobach noworodków z atrezją dróg żółciowych. mRNA oznaczano ilościowo metodą PCR w czasie rzeczywistym i wyrażano jako stosunek do ludzkiego HPRT. n = 9 dla atrezji dróg żółciowych i n = 7 dla kontroli; fałd zmiany dla wszystkich genów, z wyjątkiem NCR3 i FCGR3B, są statystycznie istotne (P <0,05). Aktywowane komórki NK wypełniają wątrobę w eksperymentalnej atrezji dróg żółciowych. Aby dokładnie określić liczbę i funkcjonalne zaangażowanie wątrobowych komórek NK w patogenezie atrezji dróg żółciowych, określiliśmy ilościowo podtypy limfocytów, neutrofili i makrofagów w wątrobach noworodków myszy BALB / c 7 i 14 dni po wstrzyknięciu ip soli fizjologicznej (jako kontrole) lub 1,5 x 106 jednostek kształtujących ogniska (FFU) RRV w ciągu 24 godzin od urodzenia, jak opisano wcześniej (8, 9). Stwierdziliśmy, że wszystkie linie komórek jednojądrzastych wzrastały w wątrobie po wstrzyknięciu RRV w obu punktach czasowych, przy czym komórki NK wzrastały od 8 do 10 razy w porównaniu z kontrolnymi wstrzykniętymi solą fizjologiczną (P <0,05, Figura 2, A i B). Ryc. 2Zasiedlenie noworodków przez komórki zapalne po prowokacji RRV. Oparte na cytometrii przepływowej komórki wątrobowe jednojądrzaste w 7 (A) i 14 (B) dni po RRV lub inokulacja roztworem soli fizjologicznej u myszy jednodniowych. Osie pionowe pokazują średnią liczbę komórek na wątrobę. SD. n = 3. 4 dla każdej grupy i punktu czasowego dla wszystkich eksperymentów; * P <0,05, RRV w porównaniu do grup soli fizjologicznej (kontrolnej). Poziome osie pokazują markery powierzchni identyfikujące określone typy komórek. Aby uzyskać głębszy wgląd w to, czy ten wzrost komórek NK może być ważny dla fenotypu atrezji, najpierw określiliśmy ekspresję receptora Ifn ., Nkg2d powierzchni, granzym B i perforyny (efektorów synapsy immunologicznej). Analiza metodą cytometrii przepływowej wykazała, że wątrobowe komórki NK nadeksprymowały wszystkie 4 mediatory zapalne u myszy, którym wstrzyknięto RRV, kilka razy w stosunku do kontrolnych soli fizjologicznej tuż przed (5 dni) i na początku (7 dni) niedrożności przewodu (Figura 3A). [przypisy: karmienie gołębi pocztowych, amc esk, projekt ustawy o zdrowiu publicznym ] [patrz też: karma dla owczarka niemieckiego, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego, testy osobowości psychologia ]