Skip to content

Noworodkowe komórki NK celują w nabłonek kanału mysiego poprzez Nkg2d i powodują uszkodzenie tkanki w doświadczalnej atrezji dróg żółciowych ad 5

1 miesiąc ago

256 words

Gwiazdki wskazują światło kanału żółciowego. Skalowane pręty: 50 .m. Ekspresja cytokin i chemokin po zakażeniu RRV. Ekspresja mRNA w wątrobie dla Ifng, Il12p40, Cxcl9, Cxcl10, perforyny, granzymów A i B i Nkg2d w 3, 7 i 14 dni po wstrzyknięciu RRV myszom BALB / c i myszom BALB / c zubożonym w komórki NK. Poziom podstawowy ekspresji mRNA jest pokazany w kontrolowanych wstrzykniętym roztworze soli jako przerywane czarne linie. n = 3. 4 na grupę i na punkt czasowy; * P <0,05. Tabela Częstość występowania niedrożności zewnątrzwątrobowych dróg żółciowych Wymóg kontaktu dla indukowanej przez komórkę NK lizy cholangiocytów. Cytotoksyczność zależna od kontaktu poprzez ekspresję receptorów na powierzchni komórki jest kluczowym mechanizmem stosowanym przez komórki NK do uszkadzania komórek docelowych i minimalizowania niepożądanych efektów osób postronnych (22, 23). Aby określić, czy liza cholangiocytów z udziałem komórek NK wymaga bezpośredniego kontaktu / zaangażowania, zmodyfikowaliśmy testy uwalniania 51Cr przez włączenie membrany Transwell, aby zapobiec bezpośredniemu kontaktowi między dwoma typami komórek, jednocześnie umożliwiając wymianę rozpuszczalnych cząsteczek wydzielanych do pożywki hodowlanej. W studzienkach kontrolnych, hodowla bez błony powodowała lizę cholangiocytów podobną do wyników z fig. 5; przeciwnie, oddzielanie typów komórek membraną całkowicie zapobiegało lizie cholangiocytów, jak wykazano przez mniej niż 1% uwalniania 51Cr (lub poziom podstawowy, dane nie pokazane). W oparciu o rolę Nkg2d jako silnego receptora aktywującego, który reguluje odpowiedź immunologiczną komórek NK i na jego zwiększoną ekspresję po zakażeniu RRV (patrz Figura 3A) iw dotkniętych ludzkich wątrobach (patrz Figura 1B) (24), określiliśmy ilościowo ekspresję Nkg2d ligandy przez cholangiocyty i wątrobę. Stwierdziliśmy, że cholangiocyty wyrażają ligandy wczesnego transkryptu (Rae1) kwasu retinowego i że wątroba nadeksprymuje mRNA dla rodziny genów Rae1, H60 i mysiego białka wiążącego białko UL16 transkryptu (Mult1) po zakażeniu RRV (Suplementowa Figura 3). ). Następnie, w celu określenia, czy komórki NK wykorzystują sygnały, w których pośredniczą Nkg2d, aby zranić cholangiocyty, wstępnie inkubowano komórki NK wątrobowe stymulowane RRV z przeciwciałami blokującymi anty-Nkg2d (przeciwciało anty-CX5) (25) przed ich zastosowaniem w testach uwalniania 51Cr; kontrolne izotypy IgG stosowano w oddzielnych studzienkach jako kontrole. Stwierdziliśmy, że przeciwciało istotnie hamowało lizę cholangiocytów po 5 godzinach, a także w przedłużonej hodowli (Ryc. 9). Te dane sugerują, że ekspresja Nkg2d jest ważnym mechanizmem stosowanym przez komórki NK do lizy mCl i zwiększyła możliwość, że może być krytyczny dla celowania cholangiocytów zakażonych RRV in vivo. Figura 9 Blok lizy cholangiocytów przez przeciwciała anty-Nkg2d. Średni (. SD) procent uwolnienia 51Cr przez linię mCl mysiego cholangiocytów po 5 i 24 godzinach hodowli z komórkami NK wątroby oczyszczonymi 7 dni po wstrzyknięciu RRV myszom 1-dniowym. Wąskie komórki NK dodano bezpośrednio do hodowli lub wstępnie inkubowano z 50 lub 100 .g blokujących przeciwciał anty-Nkg2d przed dodaniem do hodowli. Oś pozioma pokazuje stosunek komórek mCl (cel) do komórek NK (efektora). n = 3 dołki na grupę; wyniki są reprezentatywne dla 2 niezależnych doświadczeń, z wątrobowymi komórkami NK uzyskanymi z puli 15. 20 wątrób (* P <0,01). Zapobieganie indukowanemu RRV uszkodzeniu nabłonka poprzez blokowanie Nkg2d. Aby bezpośrednio zbadać znaczenie Nkg2d w indukowanym RRV uszkodzeniu dróg żółciowych, podawano 100 .g przeciwciał blokujących anty-Nkg2d lub kontrolę izotypową codziennie myszom, którym wstrzyknięto RRV lub roztwór soli w pierwszym dniu życia. Podawanie któregokolwiek typu przeciwciała nie zmienia indukowanego RRV wzrostu w wątrobowych komórkach CD3 + CD4 + (średnia . SD: 52,8%. 7,4% w porównaniu z 59,5%. 4,5% u myszy blokowanych Nkg2d, P> 0,05) lub CD3 + CD8 + komórki (średnia . SD: 32,8%> 2,9% wobec 31,8%> 1,5% u myszy zubożonych w Nkg2d, P> 0,5) 7 dni po zakażeniu. Co interesujące, blokowanie Nkg2d również nie zakłócało typowego wzrostu komórek NK wątroby po RRV, ekspresji markera aktywacji CD69 (Suplementowa Figura 4, A i B) lub nadmiernej ekspresji genów Ifng, Il12p40, Cxcl9, Cxcl10, perforyny i granzyme B po RRV (dodatkowa Figura 5). Pomimo wzrostu liczby komórek CD4 +, CD8 + i NK, podawanie przeciwciał anty-Nkg2d zapobiegało rozwojowi eksperymentalnej atrezji dróg żółciowych, co wykazano przez klirens żółtaczki, odpowiedni wzrost w całym okresie ssania i długoterminowe przeżycie (Figura 10A). Mikroskopowo, nie było dowodów na uszkodzenie nabłonka przewodu żółciowego, znaczące zapalenie obejmujące ścianę kanału lub niedrożność pozawątrobowych dróg żółciowych po inokulacji RRV (Figura 10B). podsumowując fenotyp wytworzony przez zubożenie komórek NK. Rysunek 10 Poprawiony wynik po zablokowaniu Nkg2d
[podobne: enrobioflox 10, szpital na traugutta wrocław, jak dobrze wypaść na rozmowie o pracę ]
[więcej w: pzhgp nowa sól, szpital na traugutta wrocław, czy można żyć bez trzustki ]