Skip to content

N-końcowa domena trombomoduliny maskuje białko grupy B1 o wysokiej ruchliwości, nowy mechanizm przeciwzapalny czesc 4

3 tygodnie ago

18 words

Jak wskazano, dodano rhs-TM, P-D1, P-D2 + 3, E456 lub SRAGE (każdy 100 nM). Następnie określono tworzenie DCF. * P <0,05 i ** P <0,01 w porównaniu z nietraktowanymi kontrolami. P <0,05 w porównaniu ze sparowaną grupą kontrolną bez traktowania SRAGE. W celu rozszerzenia tych wyników przy użyciu ustalonej linii komórkowej wyizolowaliśmy jednojądrzaste fagocyty z ludzkiej krwi. Jednojądrzaste fagocyty wstępnie obciążono DCF-DA i inkubowano z HMGB1. Sygnał fluorescencyjny odpowiadający utlenianiu DCF-DA obserwowano w obecności HMGB1. Dodanie rhs-TM i P-D1, ale nie P-D2 + 3 lub E456, spowodowało tłumienie sygnału fluorescencyjnego (Figura 2B). Te dane wskazują, że można zapobiegać aktywacji komórek THP-1 i mononuklearnych fagocytów pochodzących z krwi HMGB1 w obecności P-D1 TM, przypuszczalnie za pośrednictwem sekwestracji HMGB1 za pośrednictwem TM. Rola HMGB1 w zapaleniu skóry. Aby dokładniej zbadać funkcjonalną rolę HMGB1 w zapaleniu i jego potencjalnej regulacji przez TM, zastosowaliśmy model skórny zapalenia wywołanego promieniowaniem UV. We wstępnych eksperymentach zaobserwowaliśmy, że pojedyncze odsłonięcie skóry ucha myszy na promieniowanie UV (długość fali, 254 nm) powodowało wyraźne zapalenie, które można było monitorować we wczesnych stadiach przez obrzęk ucha (27). Zapalenie indukowane przez naświetlanie UV (1000 J / m2) rozwinięte przez 3 dni (Figura 3A), utrzymywało się przez okres do 5 dni i wykazywało dowody uszkodzenia tkanki / komórki (nie pokazano). Takie indukowane promieniowaniem UV uszkodzenie skóry było związane ze wzrostem ekspresji jądrowej HMGB1, jak również z wyciekiem HMGB1 z jądra do obszarów zewnątrzjądrowych (nie pokazano). Figura 3Centralna rola HMGB1 w wywołanym promieniowaniem UV. Uszkodzeniu skóry i wpływie peptydów pochodzących z TM i TM na miejscowe i układowe zapalenie z udziałem HMGB1. (A) In vivo efekt blokady HMGB1 na wywołane promieniowaniem UV. Skórne zapalenie. Przebieg czasowy obrzęku ucha mierzono po miejscowym podskórnym podaniu PBS lub SRAGE (3 pmol; IgG anty-HMGB1 (anty-HMGB1) lub nie IgG odporny (kontrolna IgY, 300 ng; w środku); lub rhs-TM (3 pmol) lub PBS przed wystawieniem na działanie promieniowania UV (na dole). W każdym przypadku podane dane są średnie. SD (n = 8). * P <0,05; ** P <0,01. (B, E) Jak wskazano, myszy otrzymywały PBS, rhs-TM, P-D1, P-D2 + 3 (każdy przy 100 nmol / kg, ip) lub sRAGE (25 nmol / kg, ip) po godzinie i 12 godzin po ekspozycji na promieniowanie UV (n = 8 na grupę). Trzy dni po traktowaniu UV, obrzęk ucha (B), ogólne cechy histopatologiczne skóry (barwienie C, H & E, powiększenie, x 100), infiltracja leukocytów (D, komórki / HPF) i miejscowy TNF-a akumulacja (E) została oceniona. Średni. Pokazano SD z 6 oznaczeń (B, D i E). * P <0,05 i ** P <0,01, w porównaniu z grupą kontrolną napromieniowaną UV, którym podano PBS. P <0,01 w porównaniu z nietraktowanymi kontrolami. (F) Wpływ peptydów pochodzących z TM i TM na prowokacyjne letalne prowokacje LPS. Lewy panel: myszy (BALB / c) otrzymywały LPS (10 mg / kg; ip) w obecności IgY anty-HMGB1 lub IgY nieimmunologicznej (3 dawki ip 2 mg / kg / mysz IgY po 2, 12 i 24 godziny po LPS). Prawy panel: myszy traktowano LPS jak opisano powyżej, a także otrzymywano rhs-TM, P-D1, P-D2 + 3 lub PBS (3 dawki ip 100 nmol / kg / mysz dla każdego peptydu). Aby zbadać mechanizmy leżące u podstaw odpowiedzi gospodarza na napromieniowanie skóry wywołane promieniowaniem UV, podaliśmy sRAGE. W obecności SRAGE zaobserwowano stępienie indukowanego promieniowaniem UV obrzęku ucha (Figura 3A, górny panel). Te dane sugerują, że interakcja HMGB1-RAGE może przyczynić się do odpowiedzi zapalnej, co prowadzi nas do przetestowania działania IgM anty-HMGB1 (Figura 3A, środkowy panel); obrzęk uszu został zmniejszony, a stopień zmniejszenia był podobny do obserwowanego po podaniu sRAGE. Dane te wskazują, że obrzęk ucha w modelu naświetlania UV jest wysoce zależny od HMGB1. Opierając się na roli HMGB1 w tym modelu zapalenia skóry, zbadaliśmy wpływ TM na zapalenie skóry z udziałem HMGB1. Podawanie rhs-TM wykazało działanie ochronne na uszkodzenie skóry wywołane promieniowaniem UV (Figura 3A, dolny panel). Ponadto efekt przeciwzapalny TM był podobny do tego, co obserwowaliśmy wcześniej w przypadku IgE sRAGE i anty-HMGB1, zgodnie z podobnym sposobem działania; tj. zapobieganie interakcji HMGB1 z miejscami akceptorowymi powierzchni komórki, takimi jak RAGE. Aby dodatkowo scharakteryzować właściwości przeciwzapalne TM w tym systemie, przeprowadziliśmy badania z P-D1 i P-D2 + 3 [patrz też: szpital na traugutta wrocław, karmienie gołębi pocztowych, zaburzenia afektywne dwubiegunowe ] [hasła pokrewne: lotowanie gołębiami młodymi, pzhgp nowa sól, szpital na traugutta wrocław ]