Skip to content

N-końcowa domena trombomoduliny maskuje białko grupy B1 o wysokiej ruchliwości, nowy mechanizm przeciwzapalny ad 9

3 miesiące ago

383 words

Peletki jądrowe ponownie ekstrahowano w buforze 20 mM HEPES / 0,4 M NaCl, pH 7,9, mM EDTA, mM EGTA, mM DTT i mM PMSF, i supernatant, po odwirowaniu przy 10000 g przez 60 minut w temperaturze 4 ° C. ° C, został oceniony pod względem zawartości HMGB1. Komórkową lokalizację HMGB1 oceniano immunohistochemicznie w zapalnej tkance skórnej monoswoistą IgG anty-HMGB1 (1 .g / ml), przygotowaną jak wskazano powyżej. W badaniach oceniających wpływ peptydów pochodzących z sRAGE i pochodnych TM na zapalenie, wszystkie materiały badano pod względem zawartości LPS za pomocą testu limbocytów amebocytów (zawartość LPS była mniejsza niż 0,25 pg na mg białka). Peptydy pochodzące od TM (tj. Rhs-TM, P-D1 i P-D2 + 3) i sRAGE-His wytworzono jak opisano powyżej. W przypadku prowokacji endotoksynami ogólnoustrojowymi podawano LPS (z serotypu E. coli O111: B4 zakupionego od Sigma-Aldrich). Inne środki podawano jak wskazano (Figury 3E i 4, C i D). Analiza statystyczna. Dane analizowano za pomocą testu uczniowskiego, a wartości P mniejsze niż 0,05 uważano za znaczące. Podziękowania Dziękujemy firmie Asahi Chemical Co. za uprzejme dostarczenie produktów rhs-TM i E456 oraz Satoshi Ogawa (Uniwersytet Kanadawski Graduate School of Medicine) i Takeo Fukuda (Uniwersytet Kagoshima) za pomocne sugestie. Badanie to zostało wsparte dotacjami na badania z Ministerstwa Edukacji, Kultury, Sportu, Nauki i Technologii Japonii: Dotacje na pomoc 13470324 i 14657627 (dla I. Maruyama) oraz 16659493 i 16390516 (dla K. Abeyama). Przypisy Niestandardowe skróty: APC, aktywowane białko C; D1, domena lektynopodobna; D2, domena podobna do EGF; D3, O-glikozylowana domena; DCF-DA, dioctan 2a, 7a-dichloro-fluoresceiny; E456, fragment TM obejmujący ostatnie 3 domeny podobne do EGF; HMGB1, białko wiążące DNA o wysokiej ruchliwości grupy B1; HPF, pole o dużej mocy; HUVEC, ludzkie komórki śródbłonka żyły pępkowej; MBP, białko wiążące maltozę; P-D1, rekombinowany polipeptyd odpowiadający D1; P-D2 + 3, rekombinowany polipeptyd odpowiadający D2 i D3; PC, białko C; PMN, neutrofil polimorfojądrowy; RAGE, receptor dla końcowych produktów glikacji; rhs-TM, rekombinowana ludzka rozpuszczalna TM; ROI, reaktywny pośredni tlen; SEAP, wydzielnicza alkaliczna fosfataza; SPR, rezonans plazmonów powierzchniowych; SRAGE, rozpuszczalny RAGE; SRAGE-His, SRAGE z ogonem polihistydynowym; TM, trombomodulina. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów.
[hasła pokrewne: uporczywy kaszel przyczyny, enrobioflox 10, zielnik hodowcy ]
[więcej w: zerwanie więzadła krzyżowego przedniego, testy osobowości psychologia, amc esk ]