Skip to content

Krytyczna rola białka wiążącego chemokiny o wysokim powinowactwie w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych wywołanym przez | 3-herpes ad 5

1 miesiąc ago

499 words

Poziomy transkryptów z genów M2 i M4 nie zostały znacząco zmienione przez obecność mutacji M3.stop. Aby wykluczyć obecność dystalnych mutacji w AHV68-M3.stop, które mogłyby skutkować fenotypowymi zmianami w AHV68-M3.stop, skonstruowaliśmy i oczyszczono wirus ratujący marker (AHV68-M3.MR), który odtworzony typ sekwencji ORF M3 do. HV68-M3.stop. Analiza Southern AHV68-M3.MR po trawieniu Avrll zademonstrowała, zgodnie z oczekiwaniem, utratę skonstruowanego miejsca Avrll (Figura 1b), a analiza Western wykazała ekspresję białka M3 (Figura 1c). M3 nie jest wymagany do wydajnej replikacji w hodowanych komórkach, śledzionie lub płucach. W oparciu o naszą zdolność do izolowania mutanta. HV68-M3.stop, ORF M3 jest nieistotna dla replikacji in vitro. Aby ocenić, czy M3 odgrywa rolę w replikacji in vitro, porównywano. HV68-M3.stop i HV68 typu dzikiego podczas wielu rund replikacji w komórkach NIH 3T12 (Figura 2a). Stwierdziliśmy, że M3 nie jest niezbędny do wydajnej replikacji w unieśmiertelnionych mysich fibroblastach. Podobnie, M3 nie było konieczne do wydajnej replikacji AHV68 w śledzionie lub płucu myszy C57BL / 6 (B6) 4 lub 9 dni po inokulacji dootrzewnowej lub donosowej (Figura 2b). Figura 2Replikacja wirusa AHV68-M3.stop. (a) Krzywa wzrostu wieloetapowego. Monowarstwy NIH 3T12 infekowano 0,05 PFU na komórkę AHV68 lub AHV68-M3.stop, a próbki zbierano w różnych czasach po zakażeniu. Pokazano średnią i SEM dwóch niezależnych eksperymentów. (b) Myszy C57BL / 6 zakażono dootrzewnowo 106 PFU lub 4 x 105 PFU donosowo i zebrano w 4 lub 9 dniu po zakażeniu. Płuca i śledziona badano na miano wirusa. Średni. SEM dwóch niezależnych eksperymentów (dziesięć myszy na stan). ip, dootrzewnowe; w, donosowo. M3 ma zasadnicze znaczenie dla skutecznej indukcji zapalenia opon mózgowych i zjadliwości po inokulacji śródmózgowej. Wykazano, że ekspresja chemokin zwiększa się po zakażeniu OUN wieloma wirusami (26-29), a chemokiny zostały postulowane jako odgrywające ważną rolę w patogenezie wirusowej OUN (patrz odnośnik 30). Biorąc pod uwagę, że. HV68 jest zdolny do infekowania wielu typów komórek w mózgu (31), testowaliśmy hipotezę, że białko M3 odgrywa rolę po śródmózgowym zakażeniu 21-dniowych immunokompetentnych myszy CD1. . HV68-M3.stop był 100-krotnie mniej zjadliwy niż HV68 typu dzikiego po inokulacji śródmózgowej (Figura 3a). To atenuowanie było specyficzne dla mutacji w ORF M3, ponieważ wirus HV68-M3.MR był równy zjadliwości wobec AHV68. Spadek zjadliwości AHV68-M3.stop w porównaniu z AHV68-M3.MR po inokulacji śródmózgowej wykazano również u myszy B6, zapewniając, że fenotyp atenuowany obserwowany u myszy CD1 nie jest zależny od szczepu (P = 0,0263, sześćdziesiąt 21). myszy BL6 poddane prostym testom prowokacji 1, 10 i 100 PFU z AHV68-M3.stop lub AHV68-M3.MR). Figura 3Virulence wirusa. HV68-M3.stop. (a) Myszy CD1 (w wieku 21 dni) zaszczepiono domózgowo różnymi dawkami AHV68, AHV68-M3.stop lub AHV68-M3.MR, a następnie przez 2 tygodnie. Każdy punkt danych reprezentuje średnią. SEM z trzech niezależnych doświadczeń (łącznie 30 myszy na dawkę, * P <0,0001). (b). IFNR. /. myszy (n = liczba myszy w pięciu oddzielnych doświadczeniach) infekowano 106 PFU albo AHV68 lub AHV68-M3.stop, a następnie przez 84 dni. Rozważaliśmy, że M3 może być niezbędny do wydajnej replikacji w mózgu pomimo braku wymogu M3 w replikacji w śledzionie i płucach (powyżej). W związku z tym ustaliliśmy miano wirusa w mózgu, płucu i śledzionie w różne dni po inokulacji śródmózgowej 100 PFU albo AHV68-M3.stop, AHV68 lub AHV68-M3.MR. W szczycie replikacji wirusa w mózgu (dzień 5, fig. 4a) wystąpił około dziesięciokrotny spadek miana wirusa w mózgu, który był specyficzny dla mutacji w ORF M3 (P = 0,0019). Ten spadek był znacznie mniejszy w 7 dniu po inokulacji. Zgodnie z danymi po inokulacji dootrzewnowej lub donosowej (Figura 2), po inokulacji śródmózgowej nie było roli M3 w replikacji wirusa w płucach lub śledzionie (Figura 4, b i c). Figura 4 Miano wirusa po wewnątrzmózgowym zakażeniu wirusem HV68-M3.stop. Myszy CD1 (w wieku 21 dni) zaszczepiono domózgowo 100 PFU albo AHV68, AHV68-M3.stop, albo AHV68-M3.MR. W różnych punktach po zakażeniu oznaczano miano wirusa w mózgu (a), śledzionie (b) lub płucu (c). Każdy punkt danych reprezentuje średnią. SEM dwóch niezależnych eksperymentów (dziesięć myszy na stan) [więcej w: enrobioflox 10, zielnik hodowcy, zaburzenia afektywne dwubiegunowe ] [podobne: czy można żyć bez trzustki, projekt ustawy o zdrowiu publicznym, apteka hygea zielona góra ]