Skip to content

Hepatotoksyczność indukowana acetaminofenem u myszy zależy od Tlr9 i Nalp3 inflammasome czesc 4

1 miesiąc ago

367 words

Ta regulacja w górę pro-IL-1. i proAl-IL-18 był hamowany przez antagonistę Tlr9 ODN2088 i nie występował w LSEC z Tlr9a / p. myszy. Aby potwierdzić in vivo znaczenie IL-1. i IL-18 w indukowanej przez APAP hepatotoksyczności, daliśmy pojedynczą toksyczną dawkę APAP myszom typu dzikiego, w których IL-1P został zneutralizowany, a także do Il18. /. myszy. W przypadku braku albo IL-1. lub IL-18, stwierdzono istotnie zmniejszoną śmiertelność w porównaniu z myszami typu dzikiego w odpowiedzi na APAP (Figura 3, G i H). Zmniejszona śmiertelność i uszkodzenie wątroby u myszy pozbawionych składników inflamasomu Nalp3. Pro. IL-1. i pro-IL-18 wymagają, aby cięcie stało się biologicznie aktywne, i dzieje się to przeważnie poprzez kapsydę-1 (10). To regulacyjne znaczenie kaspazy-1 wykazuje fakt, że wiele komórek konstytutywnie syntetyzuje proA IL-18, ale nie ma funkcjonalnej IL-18 do rozszczepienia i aktywacji (26). Znaczenie kaspazy-1 w pro. IL-1. i pro-obróbkę IL-18 jest znana od jakiegoś czasu, a ostatnio zidentyfikowano składniki molekularne odpowiedzialne za aktywację kaspazy-1. Składają się one z rodziny białek cytozolowych, które tworzą kompleks o nazwie inflammasom składający się z członka rodziny NALP, białka adaptacyjnego ASC i kaspazy-1 (17). Najlepiej scharakteryzowane cząsteczki NALP, które mogą aktywować kaspazę-1 to Nalp3, który sam może być aktywowany przez moczan monosodowy (MSU) i ATP. Inny członek rodziny NLR, Ipaf, może także aktywować kaspazę-1 w odpowiedzi na bakterie Gram-ujemne. Ważna rola IL-1. a IL-18 w hepatotoksyczności indukowanej przez APAP i ich zależność od casapse-1 w celu aktywacji skierowała nas do zbadania roli szlaku kaspazy-1 w hepatotoksyczności APAP. Testowaliśmy wymóg obecności składników inflammasomu za pomocą myszy z niedoborem kaspazy-1, ASC, Nalp3 lub Ipaf (Casp1 (3, P, ASCy / p, Nalp3 p / p, Ipaf A / P). Znaleźliśmy Casp1. / ., ASC. / ., i Nalp3. /. myszy były znacznie mniej podatne na uszkodzenie indukowane przez APAP niż kontrole (Figura 4, A (C), ale Ipaf. /. myszy nie były chronione (Figura 4D). Analiza histologiczna wykazała, że było mniej uszkodzeń wątroby przy braku kaspazy-1, ASC lub Nalp3 (ryc. 4E). Pomiary poziomu ALT w surowicy potwierdziły to, pokazując znacząco obniżoną ALT w surowicy w Casp1. /. i Nalp3. /. myszy (P <0,03, Figura 4F). To demonstruje kluczową rolę szlaku Nalp3 inflammasome i potwierdza ważną rolę IL-1. i IL-18 w wywołanym APAP uszkodzeniu wątroby. Całkowita wątrobowa proA IL-1. poziomy wzrosły w Nalp3. /. myszy w stopniu porównywalnym do tego u myszy Nalp3 + / +; jednak nie było wzrostu IL-1 w surowicy. w Nalp3. /. myszy, zgodne z rolą Nalp3 w aktywacji kaspazy-1 (Suplementowa Figura 1, A i B, materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; doi: 10,1172 / JCI35958DS1). W wątrobie Tlr9 ulega ekspresji głównie w sinusoidalnych komórkach śródbłonka, dlatego ważne było ustalenie, czy w tych komórkach występuje cięcie kaspazy-1 podczas hepatotoksyczności indukowanej przez APAP. Rzeczywiście, 12 godzin po podaniu APAP, wyizolowaliśmy LSEC, a analiza Western blot wykazała rozszczepienie kaspazy-1 w tych komórkach (Figura 4G). Rycina 4 Hepatotoksyczność zależna od APAP zależy od Nalp3, ale nie od Ipaf, inflammasomu. (A) Przeżycie Casp1. /. i kontrolują myszy po wstrzyknięciu ip APAP w dawce 500 mg / kg (Casp1 + / +: n = 12, Casp1a / a: n = 12, P <0,04) (B) Przeżycie ASC. /. i kontrolowanie myszy po APAP (ASC + / +: n = 15, ASC2 / .: n = 15, P <0,03). (C) Przetrwanie Nalp3. /. i kontrolowanie myszy po APAP (Nalp3 + / +: n = 15, Nalp3 p / n: n = 15, P <0,006). (D) Przetrwanie IPPC. /. i kontrolowanie myszy po APAP (Ipaf + / +: n = 12, Ipaf. / .: n = 8, P = NS). (E) Barwienie wątroby H & E (oryginalne powiększenie, x 20) z typu dzikiego, Casp1. / ., ASC. /. I Nalp3. /. myszy 12 godzin po wstrzyknięciu ip PBS lub APAP, wykazujących zmniejszone zapalenie martwicy i krwotok u wszystkich myszy pozbawionych składników inflamasomu Nalp3. (F) Serum ALT z typu dzikiego, Casp1 (3, / N, Nalp3 y / y i Ipafa /. myszy 12 godzin po APAP. W Casp1. /. i Nalp3. /. w surowicy, poziomy ALT były znacząco niższe niż w surowicy typu dzikiego po APAP (P <0,03) (G) Aby potwierdzić aktywację Casp1 in vivo w komórkach śródbłonka, 24 godziny po podaniu APAP lub kontrolnej PBS wyizolowano komórki sinusoidalne wątroby i cięcie kaspazy-1 wykrytej metodą Western blotting. Paski błędów wskazują SD. Aspiryna hamuje szlak kaspazy-1 i chroni przed śmiertelnością indukowaną przez APAP. Powyższe dane zidentyfikowały szlaki krytyczne dla hepatotoksyczności APAP, które zbiegają się na kaspazie-1 [hasła pokrewne: amc esk, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego, czy można żyć bez trzustki ] [więcej w: apteka hygea zielona góra, zaburzenia afektywne dwubiegunowe, jak dobrze wypaść na rozmowie o pracę ]