Skip to content

Hepatotoksyczność indukowana acetaminofenem u myszy zależy od Tlr9 i Nalp3 inflammasome cd

2 tygodnie ago

564 words

W kontroli Tlr9. /. myszy, nie było znaczących zmian w transaminazach w surowicy i wątrobowych transkryptach IL-1. i IL-18 po bezpośrednim podaniu DNA z apoptotycznych lub zdrowych hepatocytów. Paski błędów wskazują SD. DNA z komórek apoptotycznych podwyższa poziom aktywności pro-IL-1. i pro-IL-18 w sposób zależny od Tlr9. Aby bezpośrednio sprawdzić, czy apoptotyczny DNA może zwiększać ekspresję pro. IL-1. i indukować uszkodzenie wątroby, wstrzyknęliśmy DNA (200 .g / mysz) ze zdrowych i apoptotycznych hepatocytów bezpośrednio do żyły wrotnej myszy typu dzikiego i zbadano regulację w górę pro IL-1. Dwanaście godzin po wstrzyknięciu DNA nastąpiła znacząca regulacja w górę pro-IL-1 (3. transkrypt i wzrost poziomów ALT w surowicy (Figura 2, E i G). Pro. IL-1. zwiększenie aktywności i zwiększenie aktywności AlAT były znacznie większe w odpowiedzi na DNA z apoptotycznego w porównaniu ze zdrowymi komórkami. IL-18 jest ważna w wielu typach uszkodzenia wątroby i zależy również od kaspazy-1 pod względem cięcia i aktywacji (20). Istnieje znaczny poziom podstawowy mRNA pro-IL-18 w wielu typach komórek, a to może być dalej zwiększone przez infekcję wirusową i produkty bakteryjne (21, 22). Podobnie jak w przypadku proA IL-ip, występowała znacząca regulacja w górę proAlL-18 w odpowiedzi na DNA ssaków, a wzrost ten był największy w odpowiedzi na DNA z apoptotycznych hepatocytów (Figura 2F). Aby potwierdzić tę regulację pro-IL-1. i proAl-18 i wzrost ALT w surowicy były spowodowane działaniami DNA hepatocytów przez Tlr9, eksperymenty przeprowadzono równolegle w Tlr9a /. myszy. Nie było żadnych znaczących zmian w obu pro-IL-1. lub pro-IL-18 i brak wzrostu ALT w surowicy (Figura 2, Hj.J). DNA z komórek apoptotycznych podwyższa poziom pro. IL-1. i pro-IL-18 w śródbłonku sinusoidalnym w sposób zależny od Tl9. Wykazując ważną rolę Tlr9 w indukowanym przez APAP i DNA uszkodzeniu wątroby, byliśmy zainteresowani identyfikacją typu komórek wątroby odpowiadających na Tlr9. Wiele typów komórek w wątrobie ma zdolność odpowiedzi na Tlr9, w tym komórki gwiaździste i komórki NKT (23). Jednakże w wątrobie Tlr9 ulega ekspresji przede wszystkim na śródbłonku sinusoidalnym, dlatego też skupiliśmy się na tym typie komórki jako kandydacie do aktywacji Tlr9 i regulacji w górę proA IL-1. i pro-IL-18 (24). Aby wstępnie sprawdzić, czy klasyczne nieimmunologiczne komórki, takie jak śródbłonek, są ważne w zwiększaniu ekspresji pro. IL-1. i pro-IL-18 po indukowanej przez APAP hepatotoksyczności, podano toksyczną dawkę APAP genetycznie zmienionym myszom pozbawionym genów kodujących Rag1 i wspólny łańcuch gamma (Ragl . / . / a) i porównano je z Rag1 + / +. myszy + / +. Rag1. / . /. myszy pozbawiono komórek T, B, NK i NKT, przy czym zmniejszono liczbę innych linii, a ich wątroby nadal wykazywały znaczącą regulację w górę pro (IL-1). i pro-IL-18, co sugeruje, że komórki nieimmunologiczne odgrywają główną rolę (Figura 3, A i B) (25). Figura 3DNA z apoptotycznych hepatocytów zwiększa proA IL-1. i poziomy pro-IL-18 transkryptu w pierwotnych komórkach śródbłonka wątroby, a to jest hamowane przez antagonistę Tlr9. (A i B) Aby określić, czy indukowana przez APAP regulacja dodatnia pro. IL-1. i proAl-IL-18 była zależna od komórek odpornościowych, badaliśmy wątroby Ragl . / . /. myszy, którym brakuje większości populacji komórek odpornościowych. Występowała znacząca regulacja w górę transkryptów obu cytokin w wątrobie Ragl . / . /. myszy (* P <0,001 i ** P <0,01). (C i D) Hodowla pierwotnych mysich komórek śródbłonka z myszy Tlr9 + / + z DNA z apoptotycznych (APOP), ale nie zdrowych hepatocytów powoduje regulację w górę proA IL-1 (3. i pro-IL-18, a to jest obniżone przez antagonistę Tlr9 ODN2088 (* P <0,001). (E i F) Hodowla mysich komórek śródbłonka z Tlr9a /. myszy z DNA pochodzącym z apoptotycznych i zdrowych hepatocytów nie powoduje zwiększenia aktywności pro (IL-1. i pro-IL-18. (G) Aby ustalić znaczenie IL-1. w hepatotoksyczności APAP, anty-IL-1. przeciwciało (0,2 mg na mysz) zastosowano do neutralizacji in vivo. To demonstruje znaczący wzrost przeżywalności myszy typu dzikiego w obecności IL-1. zobojętnianie w porównaniu z przeciwciałem kontrolnym po APAP (przeciwciało kontrolne: n = 10, antyA IL-1 A: n = 10, P <0,02). (H) Aby ustalić znaczenie IL-18 w hepatotoksyczności APAP, leczono Il18. /. i myszy Il18 + / + z APAP. Istniało znacznie lepsze przeżycie w Il18. /. w porównaniu z myszami Il18 + / + (Il18 + / +: n = 10, Il18 A / a: n = 7, P <0,036). Paski błędów wskazują SD. Następnie bezpośrednio przebadano, czy DNA z apoptotycznych hepatocytów (50 .g / ml) może zwiększać ekspresję pro- | IL-1. i pro-IL-18 w wątrobowo-sinusoidalnych komórkach śródbłonka (LSEC) od myszy typu dzikiego i stwierdzono znaczącą regulację w górę po 24 godzinach po hodowli (Figura 3, C i D) [hasła pokrewne: lotowanie gołębiami młodymi, projekt ustawy o zdrowiu publicznym, karmienie gołębi pocztowych ] [hasła pokrewne: szpital na traugutta wrocław, czy można żyć bez trzustki, projekt ustawy o zdrowiu publicznym ]