Skip to content

Hepatotoksyczność indukowana acetaminofenem u myszy zależy od Tlr9 i Nalp3 inflammasome ad

1 miesiąc ago

284 words

Nasze badania pokazują, że istnieje zapotrzebowanie na Tlr9 i składniki inflamasomu Nalp3 na zapalenie wywołane APAP i pełną hepatotoksyczność. Wymóg Tlr9 wynika z aktywacji Tlr9 na wątrobowych komórkach śródbłonka sinusoidalnego przez endogenny DNA z apoptotycznych hepatocytów. Antagoniści Tlr9 i aspiryna przeciwzapalna znacznie zmniejszają jałowe stany zapalne i uszkodzenia wątroby, zmniejszając aktywność szlaku Tlr9. Wyniki Zmniejszona śmiertelność i uszkodzenie wątroby w Tlr9. /. myszy w odpowiedzi na APAP. Aby sprawdzić, czy Tlr9 odgrywa rolę w regulacji w górę IL-1 p, oceniliśmy ilościowo proA IL-1 (3). transkrypty w wątrobie Tlr9 + / + i Tlr9. /. myszy 12 godzin po pojedynczej toksycznej dawce APAP (ip, 500 mg / kg). Wystąpił znaczny wzrost pro-IL-1. transkrypty w wątrobach myszy Tlr9 + / + 12 godzin po iniekcji APAP, która była znacznie mniejsza w Tlr9. /. myszy (Figura 1A). Aby ustalić, że zmniejszenie pro. IL-1. ekspresja była związana ze zmniejszeniem uszkodzenia wątroby, testowaliśmy transaminazę alaninową w surowicy (ALT) i zbadano histologię wątroby 12 godzin po wstrzyknięciu APAP. W Tlr9. /. u myszy, poziomy ALT w surowicy były znacząco niższe, a występował mniej krwotoków wątrobowych i martwicy (wykres 1, B i C). Aby sprawdzić, czy zredukowany pro. IL-1. ekspresja i hepatotoksyczność były związane z poprawą przeżycia, monitorowaliśmy Tlr9 + / + i Tlr9. /. myszy ponad 72 godziny po APAP. Drastycznie zmniejszyła się śmiertelność w Tlr9. /. myszy po APAP, w porównaniu z myszami Tlr9 + / + (Figura 1D). Figura Hepatotoksyczność zależna od APAP zależy od Tlr9. (A) Zwiększenie całkowitej ilości pro-IL-1. transkrypt w myszach Tlr9 + / + 12 godzin po APAP (500 mg / kg), który jest znacznie mniejszy w Tlr9. /. w porównaniu z myszami Tlr9 + / + (* P <0,01). (B) Znacząco niższe poziomy transaminaz w surowicy w Tlr9a /. w porównaniu z myszami Tlr9 + / + 12 godzin po pojedynczej toksycznej dawce APAP (* P <0,01). (C) Mniej krwotoku z wątroby i zapalenia martwicy w Tlr9. /. w porównaniu z myszami Tlr9 + / + 12 godzin po APAP (barwienie H & E, oryginalne powiększenie, x 20). (D) Krzywe przeżywalności Kaplana-Meiera dla Tlr9 + / + i Tlr9a /. myszy ponad 72 godziny po pojedynczej toksycznej dawce APAP (Tlr9 + / +: n = 15, Tlr9a / a: n = 17, P <0,04). Paski błędów wskazują SD. Ctrl, kontrola. Antagoniści TLR zmniejszają uszkodzenie wątroby wywołane APAP. Wykazano zmniejszenie uszkodzenia wątroby i poprawę przeżycia w Tlr9. /. myszy, badaliśmy, czy u myszy Tlr9 + / + można zmniejszyć uszkodzenie wątroby przy podawaniu antagonisty Tlr9. Antygenowi Tlr9 ODN2088 (50 .g x 2) lub PBS wstrzyknięto ip myszom Tlr9 + / + bezpośrednio po i po 6 godzinach po wstrzyknięciu APAP, a surowicę i całą mysią wątrobę uzyskano po 12 godzinach po wstrzyknięciu APAP w ilościowym czasie rzeczywistym. PCR (Q-PCR) i test ALT. Wstrzyknięcie ODN2088 znacząco zmniejszyło pro- | IL-1. transkrypt i poziomy ALT w surowicy (ryc. 2, A i B). Następnie chcieliśmy ustalić, czy nastąpiła poprawa przeżycia z hepatotoksyczności APAP przy użyciu antagonisty TLR w rozwoju klinicznym. Sekwencja immunoregulacyjna (IRS) 954 może hamować Tlr9 i Tlr7 i wykazano, że łagodzi ona chorobę w modelach układowego tocznia rumieniowatego (18, 19). Podaliśmy IRS 954 (150 .g / mysz ip) natychmiast po toksycznym APAP dawki i 14, a na koniec 28 godzin. Podawanie IRS 954 spowodowało znaczące zmniejszenie aktywności aminotransferaz w surowicy po 12 godzinach i poprawę przeżywalności (Figura 2, C i D) (kontrola: n = 14, IRS 954: n = 14, P <0,006). To dodatkowo potwierdza znaczenie Tlr9 w hepatotoksyczności APAP, a także identyfikuje realną nową strategię terapeutyczną, która może mieć zastosowanie w innych chorobach spowodowanych sterylną odpowiedzią zapalną. Figura 2 Redukcja uszkodzenia wątroby przez antagonistę Tlr9 i indukcja uszkodzenia wątroby przy pomocy apoptotycznego DNA. (A i B) Traktowanie myszy Tlr9 + / + antagonistą Tlr9 ODN2088 znacząco odwracało indukowany przez APAP wzrost poziomu pro-IL-1 (3 w wątrobie. transkrypcja i poziomy transaminaz w surowicy (* P <0,01). (C i D) Antagonista IRS 954 Tlr7 i Tlr9 znacząco zmniejszył śmiertelność z APAP w ciągu 72 godzin, a także zmniejszone zwiększenie ALT w surowicy po 12 godzinach po APAP (kontrola: n = 14, IRS 954: n = 14, P <0,006; * P <0,01). (E. G) Bezpośrednie podawanie DNA z apoptotycznych hepatocytów do krwi dostarczającej wątrobę skutkowało wzrostem transkryptów wątrobowych pro. IL-1. i pro-IL-18 i transaminazę w surowicy u myszy Tlr9 + / +. Zarówno transaminazy w surowicy, jak i proA IL-1. a poziomy transkrypcji pro-IL-18 były niższe po wstrzyknięciu DNA ze zdrowych hepatocytów (* P <0,01) [więcej w: olej kokosowy wybielanie zębów, projekt ustawy o zdrowiu publicznym, pzhgp nowa sól ] [patrz też: karmienie gołębi pocztowych, lotowanie gołębiami młodymi, pzhgp nowa sól ]