Skip to content

Dynamiczna dystrybucja kalpainy specyficznej dla mięśni u myszy odgrywa kluczową rolę w adaptacji stresu fizycznego i jest upośledzona w dystrofii mięśniowej ad 7

2 tygodnie ago

763 words

Można to wytłumaczyć zmianą lokalizacji p94 i / lub hipotezą, że jego degradująca proteaza lub proteazy są obniżone przez p94. Niektóre z tych białek (podjednostki proteasomu, EF-Tu i eEF-1 (3) nie są regulowane w górę lub są nawet obniżone u myszy p94KI-ex, co sugeruje, że są one pod kontrolą aktywności proteazy p94. Chociaż poziomy CK są podwyższone u pacjentów LGMD2A z mutacją CAPN3-zerową, u myszy p94KO oraz u pacjentów z innymi MD (3, 11, 13), nasze myszy p94KI nie wykazywały podwyższonej wartości CK, gdy były niespenknie. Podobnie, niektórzy pacjenci LGMD2A, którzy eksprymują białko p94 o normalnej wielkości z mutacjami missenowymi, takimi jak P359L, wykazują prawie normalne wartości CK (38). Biorąc pod uwagę, że P359L, który sąsiaduje z jedną z pozostałości w miejscu aktywnym (N358), prawdopodobnie pogarsza aktywność proteazy p94, odkrycia te sugerują, że nowa funkcja p94, a nie jego aktywność proteazy, bierze udział w utrzymaniu sarcolemma. Konieczne będą dalsze badania w celu wyjaśnienia tej funkcji, co można ułatwić przez porównanie myszy p94KI z myszami p94KO. Wcześniejsze badania wykazały, że dynamika białka wysoce zorganizowanego sarcomere jest ważna dla integralności strukturalnej sarcomere (39). Biorąc pod uwagę, że p94KI-ex wykazuje zaostrzony fenotyp MD, sugerujemy, że zmniejszona zdolność nieaktywnego p94 do szybkiej zmiany jego rozkładu w odpowiedzi na stres fizyczny skutkuje opóźnioną lub niewystarczającą reakcją adaptacyjną miocytów na stres fizyczny, co przyczynia się do patogenezy MD . Zatem jest prawdopodobne, że p94 działa jako czujnik wykrywający fizyczne obciążenie przez autoprzetwarzanie zależne od rozciągania. Ponieważ mięśnie szkieletowe są wyjątkowo przystosowalne do różnych bodźców (ćwiczenia, odnerwienie, głód, niedotlenienie, inwazyjna chirurgia, uraz itp.), Muszą wymagać maszyn komórkowych do jakościowego i ilościowego wykrywania tych bodźców. W tym kontekście p94 jest doskonałym kandydatem jako czujnik intensywności stresu fizycznego. Nasze wyniki świadczące o istotności regulowanych przez czasoprzestrzeń zachowań p94 w odpowiedzi ochronnej mięśni szkieletowych dostarczają nowatorskich i ważnych wglądów w złożoną patogenezę LGMD2A, a także pomysły na opracowanie przyszłych strategii terapeutycznych. Ponadto, nasze obserwacje mogą być ważne dla zrozumienia, w jaki sposób stres fizyczny w mięśniach szkieletowych jest powiązany z adaptacyjnymi odpowiedziami komórkowymi, chociaż dokładne mechanizmy molekularne powinny być dalej badane. Metody Zwierzęta doświadczalne. Wszystkie procedury wykorzystujące zwierzęta doświadczalne zostały zatwierdzone przez Komitet Eksperymentalnej Opieki nad Zwierzętami i Używania Rinshoken, a zwierzęta były leczone zgodnie z wytycznymi komisji. Myszy C57BL / 6 zakupiono od Nihon CLEA Inc. Komórki Tg ekspresjonujące rekombinazę a zostały dostarczone przez Jackson Laboratory. Konstrukcja wektora docelowego i generacja p94KI. Mutacje mutacji C129S i gen oporności na neomycynę (neoR) oflankowane sekwencjami loxP wprowadzono odpowiednio do eksonu 3 i intronu 3 genu Capn3 w mysich komórkach ES poprzez elektrotransfekcję targetującego wektora (Suplementowa Figura 1A). Rekombinowane komórki ES użyto do wstrzyknięcia blastocysty, aby wytworzyć myszy chimeryczne przenoszące linię płciową. Heterozygoty F1 z prawidłową rekombinacją krzyżowano z myszami Tg eksprymującymi rekombinazę Cre w ich komórkach linii płciowej. Uzyskane myszy potwierdzono analizą Southern blot, aby uzyskać mutację C129S bez neoR i krzyżowano wstecznie z myszami C57BL / 6J przez więcej niż 8 pokoleń (patrz Dodatkowa figura w celu uzyskania szczegółów). Protokół z myszką i pomiar CK w surowicy. Protokół ćwiczeń został opracowany zgodnie z wcześniejszym zgłoszeniem (40) z niewielkimi modyfikacjami. Pokrótce, myszy WT i p94KI (w wieku od 15 do 18 tygodni) wykonano na bieżniach motorowych (MK-680S, Muromachi Inc.). Program biegu był następujący: (spadek 16 °, 18 m / min × 20 min) × 3 zestawy z 3-minutowymi przerwami między każdym zestawem. Próbki mięśni i krwi pobrano natychmiast po ćwiczeniu, chyba że podano inaczej. W przypadku testu EBD, 2% EBD w PBS wstrzyknięto dożylnie natychmiast po wysiłku (10 .l / g masy ciała) (41), a myszy uśmiercano następnego dnia. Ponieważ protokół ten nie wykazał prawie żadnego wybarwionego EBD miowłókien u myszy WT, w innym zestawie eksperymentów, EBD uprzednio wstrzyknięto przed wysiłkiem, a myszy natychmiast uśmiercano. Rozcięte mięśnie natychmiast zamrożono w izopentanie chłodzonym ciekłym azotem. Do pomiaru CK w surowicy pobrano krew z serca pod znieczuleniem
[patrz też: olej kokosowy wybielanie zębów, jak dobrze wypaść na rozmowie o pracę, lotowanie gołębiami młodymi ]
[patrz też: szpital na traugutta wrocław, czy można żyć bez trzustki, projekt ustawy o zdrowiu publicznym ]