Skip to content

Dynamiczna dystrybucja kalpainy specyficznej dla mięśni u myszy odgrywa kluczową rolę w adaptacji stresu fizycznego i jest upośledzona w dystrofii mięśniowej ad 5

3 miesiące ago

860 words

Nawet w miofibresach dodatnich pod względem EBD, lokalizacja dysferliny była prawidłowa, co wskazuje, że sarkolema nie była znacząco zakłócona, jak wcześniej podano (29, 30). W przeciwieństwie do myszy WT-ex, u myszy p94KI-ex, miowłókna, które były pozytywne dla EBD wykazywały słabsze sygnały MARP2 i nieprawidłową lokalizację dysferliny (Figura 5, Df i JpL). Wyniki te wskazują, że ćwiczenie spowodowało przerwanie błony komórkowej i degenerację miofiberu u myszy p94KI. Figura 5 Pobieranie EED w miofibry ćwiczonych myszy WT i p94KI. Wstrzyknięte EBD myszy WT i p94KI poddano biegowi w dół, a następnie uśmiercano zaraz po wysiłku. Kręgi podłużne mięśni prostowników długich (EDL) były wizualizowane za pomocą autofluorescencji EBD (A, D, G i J), przeciwciał anty-MARP2 (B i E) lub anty-dysferlin Ab (H i K). Scalone obrazy są pokazane po prawej stronie (C, F, I i L). Absorpcja EBD przez miofibry obserwowano zarówno w próbkach WT-ex, jak i p94KI-ex. (AOC) U myszy WT-ex, miobindery z pozytywnym wynikiem EBD miały wysokie sygnały MARP2 (białe groty strzałek), ale nie wszystkie miofibry z wysokimi sygnałami MARP2 były pozytywne EBD (otwarte groty strzałkowe). (D. F) U myszy p94KI-ex miowłókna z wychwytem EBD wykazywały niższe sygnały MARP2 (gwiazdki) niż te z myszy WT i ulegały degeneracji (patrz poniżej). (G. I) U myszy WT-ex zaobserwowano prawidłowe wybarwianie dysferlinami (sarkolemma i prążkowanie) we włóknach EBD-pozytywnych, co wskazuje, że nie ulegały degeneracji (29, 30). (J. L) U myszy p94KI-ex, miofibry dodatnie pod względem EBD wykazywały nieprawidłową lokalizację dysferiny, co wskazuje, że sarkolemma została zakłócona i włókna uległy degeneracji (gwiazdki). Skalowane pręty: 100 urn (A = F); 20. M (G. L). Stany cząsteczkowe myszy p94KI naśladują myszy WT-ex. W celu dalszego zbadania zmian patofizjologicznych u myszy p94KI, analizowaliśmy ich proteomy przy użyciu mięśni TA z myszy WT, WT-ex, p94KI lub p94KI-ex z systemami iTRAQ / LC-MALDI. Spośród 660 zidentyfikowanych białek, 44 było podwyższonych (p94KI / WT> 1.2), a 18 było obniżonych (WT / p94KI> 1.2) u myszy p94KI w porównaniu z WT (Suplementowa Figura 10). Analiza mikromacierzy DNA wykazała, że poziomy mRNA tych białek pozostały niezmienione z kilkoma wyjątkami (Suplementalna Figura 10 i Tabela Uzupełniająca 1), co wskazuje, że zmiany te były w dużej mierze na poziomie białka. Niespodziewanie, ilości wszystkich białek regulowanych w górę w p94KI były zwiększone (lub niezmienione) i nie zmniejszone u myszy WT-ex w porównaniu z WT z tylko jednym wyjątkiem; przeciwnie, białka obniżone w p94KI były zmniejszone (lub niezmienione) w WT-ex (porównaj p94KI / WT i WT-ex / WT w Suplementowej Figurze 10). Ta synchroniczność silnie sugeruje, że warunki molekularne w cytozolu komórek, które zostały zmienione przez mutację p94: C129S są prawie identyczne z tymi u myszy WT-ex. Aby ujawnić leżące u podstaw mechanizmy molekularne, sklasyfikowaliśmy profile ekspresji jak wskazano w Tabeli 1, skupiając się na białkach, które reagowały na ćwiczenie różniczkowo w myszach WT i p94KI, tj. Kategoriach [WT. i p94KI. lub.] i [WT. i p94KI. lub.] w Tabeli 1. Tabela Profile ekspresji białka w mięśniu szkieletowym WT i p94KI przed i po wysiłku ekscentrycznym Kategorie te odpowiadają białkom, które są podwyższone lub obniżone przez ćwiczenia w myszach WT, ale nie udało się ich zmienić u myszy p94KI. W szczególności, MARP2 i A10 z 13 zidentyfikowanych cząsteczek związanych z hsp (w tym 6 małych hsp [sHSP], ważnych dla homeostazy komórek mięśniowych, pozycja 19) włączono do kategorii [WT. i p94KI. lub.]. Dane MARP2 są zgodne z powyższą analizą Western blot. Inne białka w kategorii [WT. i p94KI. lub.] obejmowała heksokinazę 2, enzym ograniczający szybkość glikolizy, czynniki zaangażowane w translację białka i podjednostki proteasomu, które mogą przyczyniać się do obrotu komórek mięśniowych (patrz dodatkowa legenda z 10). Wyniki te sugerują, że aktywność proteazy p94 reguluje poziomy białek w kategoriach [WT. i p94KI. lub.] i [WT. i p94KI. lub.] z ćwiczeniem. W sumie nasze wyniki potwierdzają pogląd, że p94 odgrywa ważną rolę w patogenezie MD, szczególnie w zaostrzonym zaostrzeniem MD, poprzez dynamiczną zależną od konfiguracji regulację ekspresji MARP2 i podwyższenie poziomu białka hsp. Dyskusja Używając myszy p94KI, przedstawiamy tutaj pierwszy bezpośredni i rozstrzygający dowód na to, że utrata aktywności proteazy p94 powoduje LGMD2A, co jest pogarszane przez wiek lub aktywność fizyczną. Wykazaliśmy, że w miocytach utrata aktywności proteazy p94 powoduje (a) powolną wymianę cząsteczek p94 na linii M, (b) powolną akumulację p94 w regionie N2A w odpowiedzi na wydłużenie sarcomeryczne, oraz (c) zaburzona regulacja w górę poziomów MARP2 i hsp w odpowiedzi na stres fizyczny
[podobne: magnetyczny rezonans jądrowy, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego, czy można żyć bez trzustki ]
[patrz też: gołębniki świata, enrobioflox 10, zielnik hodowcy ]