Skip to content

Diada limfoblastycznych lizosomalnych proteaz cysteinowych powoduje degradację leku przeciwbiałaczkowego l-asparaginazy ad

1 miesiąc ago

418 words

AEP ma niezwykłą swoistość dla cięcia po asparaginie i asparaginie, wykazując selektywność nawet wśród tych reszt (21). W przypadku fragmentu C toksyny tężcowej, produkty rozszczepienia AEP wykazują antygenowe epitopy do obróbki MHC klasy II (22). Pacjenci z Ph + częściej wykazują słabą odpowiedź terapeutyczną na ASNazę (7), należą do kategorii wolniejszej odpowiedzi (1) i rozwijają nadwrażliwość (V. Saha, niepublikowane obserwacje). To doprowadziło nas do spekulacji, że proteazy obecne w limfoblastach mogą przecinać i dezaktywować bakteryjne asparaginazy i nasilać rozwój reakcji alergicznych. Taki proces zapewniłby spójne i jednoczące wyjaśnienie różnic w aktywności ASNazy u pacjentów i wyjaśniłby rozwój reakcji alergicznych. Nasze badania potwierdzają, że ASNase jest degradowany przez AEP. Ponadto, ASNaza, jak również Erwinaza, jest inaktywowana przez drugą lizosomalną proteazę cysteinową, katepsynę B (CTSB). Nasze wyniki wskazują, co uważamy za nowy mechanizm lekooporności w dzieciństwie ALL, w którym pośredniczą lizosomalne proteazy cysteinowe obecne w limfoblastach. Wyniki AEP i CTSB obecne w limfoblastach pre. B degradują ASNazę. Ekspresję AEP linii komórkowej 3 ALL (SD1, REH, SupB15) i B-limfoblastoid (HRC57) zbadano za pomocą ilościowej PCR i analizy Western blotting. SD1 i HRC57, ale nie REH i SupB15 wykazały wysoki poziom ekspresji AEP (Suplementowa Figura 1A). Aby określić, czy proteazy w lizatach komórkowych degradują ASNazę, lizaty komórkowe inkubowano z lekiem. Wyraźnie mniejszy prążek zaobserwowano podczas sondowania w lizatach komórkowych, potwierdzając cięcie ASNazy (Figura 1A). W lizatach komórek SD1 cięcie to tylko częściowo zapobiegało swoistemu wobec AEP inhibitorowi MV026630 (AEPi) (23) (Figura 1B). Całkowite zahamowanie osiągnięto, gdy AEPi połączono z koktajlem inhibitora proteazy (PIC) lub jego 2 poszczególnymi składnikami, E64 i leupeptyną, obydwoma inhibitorami proteazy cysteinowej (Figura 1B i Suplementowa Figura 1B). E64 i leupeptyna hamują CTSB. Degradacja ASNazy została całkowicie zablokowana, gdy lizaty SD1 wstępnie inkubowano z kombinacją AEPi i specyficznego dla CTSB inhibitora CA074Me (CTSBi) (24) (Figura 1B). W komórkach REH, które nie eksprymują AEP, CTSBi samo hamuje degradację (Figura 1C i Suplementowa Figura 1C). Tak więc ASNaza jest degradowana przez sam CTSB (REH) lub przez kombinację CTSB i AEP (SD1) (dodatkowa tabela 2). Jak pokazano na rysunku 2A, z naszego wcześniej opublikowanego zbioru danych ekspresji genów (20, 25), ustaliliśmy, że CTSB jest konstytutywnie eksprymowany na niskich poziomach przez wszystkie komórki białaczkowe i regulowany w górę w ostrej białaczce szpikowej (AML) (P = 0,0002). AEP był przede wszystkim poddawany nadmiernej ekspresji w podgrupach cytogenetycznych wysokiego ryzyka pre-B ALL (p <0,0001). Ekspresję tych 2 proteaz w komórkach białaczkowych otrzymanych od pacjentów z ALL pokazano na Figurze 2B (dodatkowa Figura 2 i Tabela Uzupełniająca 3). Lizaty z tych białaczkowych komórek blastycznych także degradowały ASNazę (dodatkowa Figura 3), albo przez sam CTSB albo przez kombinację CTSB i AEP; przykłady od 4 pacjentów przedstawiono na ryc. 2C. Figura 1ASNaza jest rozkładana przez proteazy cysteinowe obecne w limfoblastach preAB. Immunoblotting dla ASNazy po inkubacji ASNazy z lizatami pełnokomórkowymi z linii komórkowych. (A) ASNaza jest rozszczepiana przez komórkowe lizaty REH, SD1 i HRC57. (B) Lizaty SD1 preinkubowano z różnymi inhibitorami proteazy przed inkubacją z ASNazą. Rozszczepienie ASNazy jest częściowo zapobiegane przez AEPi i przez PIC. Całkowite hamowanie osiągnięto dzięki połączeniu AEPi i PIC. Łącząc E64 lub leupeptynę, oba składniki PIC, z AEPi, również zapobiegają degradacji. E64 i leupeptyna hamują CTSB, a połączenie AEPi i CTSBi blokuje cięcie ASNazy przez lizat komórek SD1. Linia pionowa wyznacza różne żele; przerywana linia pionowa wskazuje nieciągłe ścieżki w żelu. (C) Sam CTSBi zapobiega rozszczepianiu ASNazy przez lizat komórek REH. Figura 2AEP jest względnie nadeksprymowana w cytogenetycznych podzbiorach wysokiego ryzyka pre-B ALL, natomiast ekspresja CTSB jest względnie jednorodna we wszystkich podtypach (A) Reprezentacje poletka słupkowego względnej ekspresji mikromacierzy AEP i CTSB w białaczce blastycznej. Kategorie ostrej białaczki przedstawiono na osi x. Wysokie ryzyko (n = 24) odnosi się do podtypów pre-B ALL o cechach cytogenetycznych wysokiego ryzyka, w tym BCR-ABL1, rearanżacjach MLL, iAMP21 i hipodiploidii. Pozostałe kategorie obejmują standardowe ryzyko pre-B ALL (n = 59), linię limfocytów T ALL (n = 11) i AML (n = 26). Oś y przedstawia względny poziom ekspresji genu AEP lub CTSB [patrz też: olej kokosowy wybielanie zębów, amc esk, enrobioflox 10 ] [przypisy: projekt ustawy o zdrowiu publicznym, apteka hygea zielona góra, zaburzenia afektywne dwubiegunowe ]