Skip to content

Diada limfoblastycznych lizosomalnych proteaz cysteinowych powoduje degradację leku przeciwbiałaczkowego l-asparaginazy ad 6

2 tygodnie ago

720 words

Sugeruje to, że zarówno liza komórek, jak i egzocytoza mogą eksponować ASNazę na aktywny AEP, powodując degradację ASNazy. Figura 8 Umiarkowane aktywne AEP w komórkach SD1 gromadzi się w kierunku obrzeża komórki w dyskretnych, kwasowych przegrodach LAMP1-dodatnich. (A) Immunobarwienie lokalizuje AEP w obwodowych kwaśnych przedziałach znakowanych przez kwasotropową sondę lizosomalną. Immunobarwienie AEP w utrwalonych w formalinie cytospinach komórek SD1 preinkubowanych z przepuszczalną dla komórek sondą lizosomalną LysoTracker Red DND-99 (LyTR). Duża żółta fluorescencja agregatów na obrazach przedstawia nakładkę fluorescencji zielonej (AEP) i czerwonej (sonda lizosomalna). Oryginalne powiększenie, × 100, powiększenie optyczne, 1.6. (B) Oznaczanie żywych komórek AEP-ABP lokalizuje aktywny AEP w obwodowych pęcherzykach dodatnich dla LAMP1. LAMP1 immunobarwienie w utrwalonych w formalinie cytospinach komórek SD1 preinkubowanych z AEP-ABP. Obrazy wskazują aktywny AEP (czerwony) na obwodzie komórki, zlokalizowany w czymś, co wydaje się być dużym globularnym pęcherzykiem otoczonym przez LAMP1 (zielony). Oryginalne powiększenie, × 100, Optivar 1.6. DAPI (niebieski) plami jądro; Trans odnosi się do obrazów jasnych pól. Pręty skali: 5 m. Omówienie Spośród proteaz lizosomalnych, AEP charakteryzuje się ścisłą swoistością i selektywnością w rozszczepianiu po asparaginie i asparaginie. Wykorzystaliśmy to, aby dokładnie przeanalizować sekwencję rozszczepiania AEP ASNazy i zidentyfikować kluczowe reszty. Precyzyjna dokładność modelowania pozwoliła nam stworzyć ASNazę odporną na cięcie AEP i ustalić krytyczną naturę N24 i D124. CTSB nie wykazuje podobnej specyficzności względem substratu. To również rozszczepia się przy N24, ale podstawienie przy tej reszcie nie zapobiega rozszczepianiu CTSB (N. Patel, niepublikowane obserwacje). Tak więc otwarta konformacja pętli zawierającej N24 eksponuje cząsteczkę na atak proteolityczny przez obie proteazy cysteinowe. Rzeczywiście, krótszy okres półtrwania Erwinase może wynikać ze zwiększonej elastyczności tej pętli i / lub aktywności innych proteaz. CTSB jest klasyfikowany jako gen porządkowy i ulega konstytucyjnej ekspresji we wszystkich tkankach (36); w przeciwieństwie do AEP, jego ekspresja w limfoblastach może odzwierciedlać podstawową aktywność. CTSB jest egzocytowany lub wydzielany przez komórkę do płynu pozakomórkowego (37). Nasze wyniki pokazują, że aktywny AEP leży w dobrze określonym przedziale na obrzeżach komórki drożdżowej i sugeruje, że może on również podlegać podobnemu procesowi. Rzeczywiście, ta właściwość została wykorzystana do stworzenia aktywowanej AEP cząsteczki doksorubicyny nieprzepuszczalnej dla komórek, która wykazywała wysoką selektywność dla komórek guza wytwarzających AEP (38). Tak więc oczekuje się, że aktywne proteazy będą oddziaływać z asparaginazą jako substratem. Mechanizm klirensu l-asparaginazy nie został określony. Podczas gdy CTSB ulega ekspresji wszędzie, ekspresja AEP jest ograniczona głównie do tkanki nerkowej. Kuszące jest przypuszczenie, że CTSB bierze udział w normalnej degradacji i klirensie zarówno ASNazy, jak i Erwinazy, chociaż nie można wykluczyć klirensu innych proteaz. W przypadku ASNazy klirens przy pierwszej ekspozycji może zostać przyspieszony przez komórki białaczkowe wykazujące ekspresję AEP, przyczyniając się do powolnej wczesnej odpowiedzi na leczenie. Degradacja AEP może dodatkowo sprzyjać uczuleniu, co powoduje zwiększenie klirensu ASNazy przy kolejnych ekspozycjach. Chociaż poziomy ekspresji tych proteaz prawdopodobnie znacząco modyfikują poziomy asparaginazy, inne mechanizmy również przyczyniają się do oporności na lek. Na przykład limfoblasty limfocytów T są stosunkowo oporne na asparaginazę (7). Żadna proteaza nie ulega ekspresji na wysokich poziomach w tej podgrupie, a zatem w przypadku choroby limfocytów T mechanizm oporności na ASN-azę pozostaje nieznany. Zarówno CTSB jak i AEP biorą udział w przetwarzaniu i prezentacji antygenu, rozszczepianiu białek związanych z błoną, chorobach sercowo-naczyniowych i procesach degradacji macierzy w nowotworach. AEP nie tylko dezaktywuje ASNazę, ale rozszczepione peptydy mogą wzmacniać prezentację antygenu. Taki proces zapewnia jednolite wyjaśnienie, dlaczego niektóre dzieci, głównie te z grupy wysokiego ryzyka, nie wykazują adekwatnej odpowiedzi i / lub rozwijają reakcje alergiczne na ASNazę. Nie wykazaliśmy, że cięcie AEP nasila reakcję alergiczną na ASNazę. Te eksperymenty są trudne do wykonania retrospektywnie u pacjentów, którzy ukończyli terapię w dzieciństwie ALL. Testujemy słuszność tych obserwacji w kontekście prospektywnego badania klinicznego zaprojektowanego do oceny, czy ekspresja AEP, w ramach terapii wielolekowej, koreluje ze zmniejszoną aktywnością asparaginaz, zwiększonym tworzeniem przeciwciał i wolniejszą odpowiedzią na leczenie
[hasła pokrewne: gołębniki świata, szpital okulistyczny poznań, olej kokosowy wybielanie zębów ]
[hasła pokrewne: testy osobowości psychologia, amc esk, gołębniki świata ]