Skip to content

Angiotensynowe receptory AT1A na komórkach wyrażających receptory leptyny kontrolują spoczynkowy metabolizm ad

4 tygodnie ago

33 words

Zmiana RMR skorygowanego o ANCOVA u myszy otrzymujących icv aCSF lub ANG II po 7 dniach leczenia losartanem (n = 6 myszy leczonych aSFS, n = 11 myszy leczonych ANG IIa). Dane reprezentują średnią. SEM. * P <0,05, według testu ucznia. LEPR i AT1A kolokalizują w ARC. Przebadaliśmy wzory ekspresji LEPR i AT1A za pomocą myszy transgenicznej NZ44, która ekspresjonuje GFP wstawiony do locus AT1a w rekombinowanym transgenie transgenu (11) i myszy, które warunkowo wyrażają czerwony reporter fluorescencyjny po rekombinacji za pośrednictwem Cre w LEPR. -presję komórek (Lepr-Cre ROSA-stopflox-tdTomato) (12. 14). Zidentyfikowaliśmy komórki koekspresji LEPR i AT1A przez kolokalizację czerwonej i zielonej fluorescencji w mózgu. Komórki eksprymujące oba receptory były obfite w ARC podwzgórza, z minimalną kolokalizacją w bocznym podwzgórzu, podwzgórzu grzbietowo-mięśniowym i jądrze tractus solitarii (Figura 2A). Komórki eksprymujące oba, ale nie oba, receptory wykryto w innych regionach. Odkrycia te potwierdzają koncepcję pierwotnej kolokalizacji LEPR i AT1A w ARC. Figura 2AT1A i LEPR kolokalizują w komórkach w ARC. (A) Reprezentatywne fotomikrografie ekspresji AT1A i LEPR w różnych obszarach mózgu, w tym ARC, podwzgórzu bocznym (LH), podwzgórzu podwzgórza (DMH), podwzgórzu przyrzeczeniowym (VMH), jądrze tractus solitarii (NTS), PVN, SFO, hipokampie i kora. Pręty skali: 100 .m. (B) Startery do wykrywania rekombinacji genetycznej genu AT1a obejmują region floxed. Nienaruszona i rekombinowana ekspresja genu AT1afl / fl w FZS, kory, PVN, SON i ARC zwierząt kontrolnych i AT1ALepR-KO. (C) Ekspresja AT1A w tkankach obwodowych, w tym w sercu, nerce, wątrobie, płucach, BAT, białej tkance tłuszczowej perygnatalnej (pgWAT), sc WAT (scWAT) i mięśniu szkieletowym myszy kontrolnych i AT1ALepR-KO (n = 6 / grupa) . Dane reprezentują średnią. SEM. * P <0,05, według wielokrotnej procedury porównawczej Tukeya. (D) ekspresja ARC p-STAT3 po ip PBS lub leptynie (1 .g / g) u myszy kontrolnych i AT1ALepR-KO po 2 tygodniach leczenia HFD (myszy kontrolne traktowane PBS, n = 3 myszy kontrolne traktowane leptyną; PBS; leczonych AT1ALepR-KO myszy n = 6 traktowanych leptyną myszy AT1ALepR-KO). Pręty skali: 75 .m. Dane reprezentują średnią. SEM. 3 V, trzecia komora. AT1A w komórkach wrażliwych na leptynę jest niezbędny do homeostazy energetycznej. Aby określić, czy ANG II sygnalizujący specyficznie w komórkach wrażliwych na leptynę bierze udział w kontroli bilansu energetycznego, stworzyliśmy transgeniczny model myszy, który nie ma receptora AT1A w żadnej komórce wyrażającej długą (b) formę sygnalizacyjną LEPR (AT1afl / fl Lepr - myszy, określane dalej jako myszy AT1ALepR-KO). Aktywność rekombinazy Cre została potwierdzona przez amplifikację PCR genu AT1a przy użyciu starterów, które wytwarzają produkty o różnej wielkości, w zależności od rekombinacji za pośrednictwem Cre. Rekombinacja rekombinazowa z udziałem rekombinazy z genem AT1a została wykryta w jądrze nadoczodołowym (SON) i ARC, ale nie w narządzie subkontynentalnym (SFO), jądrze przykomorowym (PVN) ani w korze mózgowej, prawdopodobnie z powodu małej liczebności Lepr - eksprymuje komórki w tych regionach (Figura 2B). Krytycznie, z wyjątkiem tkanki płucnej, w której ekspresja AT1a była już bardzo niska na linii podstawowej, nie zaobserwowaliśmy żadnych zmian w ekspresji mRNA AT1a w tkankach obwodowych (Figura 2C). Tak więc fenotypy fizjologiczne obserwowane u myszy AT1ALepR-KO były prawdopodobnie spowodowane utratą sygnalizacji receptora ANG II na komórkach zawierających LEPR w obrębie ventromedial ARC. Co ważne, utrata receptorów AT1A na komórkach zawierających LEPR nie blokuje sygnalizacji leptyny, ponieważ fosforylacja STAT3 (p-STAT3) została zachowana w ARC myszy AT1ALepR-KO w odpowiedzi na leptynę (Figura 2D). Następnie ocenialiśmy, czy myszy AT1ALepR-KO mają zmienioną homeostazę energetyczną. W warunkach ad libitum chow-fed (Teklad Diet 7013, 18% kcal z tłuszczu) myszy AT1ALepR-KO wykazywały prawidłową masę ciała i masę tłuszczu (Figura 3, A i B). Po utrzymaniu na karmie dla dzieci, myszy te miały normalny pobór pożywienia, sprawność trawienia, aktywność fizyczną, RMR i poziom mRNA białka (Ucp1) w brunatnej tkance tłuszczowej (BAT) (Figura 3, C. G). Podczas gdy obie myszy kontrolne i myszy AT1ALepR-KO reagowały na 5-tygodniowe 45% dieta wysokotłuszczowa (HFD) (OpenSource D12451), z podwyższoną masą ciała i masą tłuszczu, myszy AT1ALepR-KO zyskały znacznie więcej masy i masy tłuszczu niż ich krewni z miotu kontrolują (ryc. 3, A i B). Nie było znaczących różnic w poborze pożywienia (Figura 3C) lub sprawności trawienia (Figura 3D) między AT1ALepR-KO i myszami z miotu kontrolnymi podczas leczenia HFD, wskazując normalną całkowitą dzienną dawkę energii [więcej w: enrobioflox 10, szpital na traugutta wrocław, zielnik hodowcy ] [patrz też: karma dla owczarka niemieckiego, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego, testy osobowości psychologia ]