Skip to content

Angiotensynowe receptory AT1A na komórkach wyrażających receptory leptyny kontrolują spoczynkowy metabolizm ad 8

4 tygodnie ago

650 words

BAT współczulnego z BAT izolowano i zawieszano na 36-gauge platynowo-irydowych elektrodach i zabezpieczano żelem silikonowym. Elektrody połączono z sondą o wysokiej impedancji (HIP-511, Grass Instruments), a sygnał neuronowy z BAT wzmocniono 100 000 razy (1 x 105), przefiltrowano przy odcięciach o niskiej i wysokiej częstotliwości odpowiednio 100 i 1000 Hz. i kierowane do resetującego integratora napięcia (B600c; University of Iowa Bioengineering). Dane rejestrowano przy użyciu urządzenia ADInstruments PowerLab z powiązanym oprogramowaniem Chart. Eksperymenty w klatkach domowych. Myszy trzymano pojedynczo w domowych klatkach, a standardową pościel zastępowano wkładem chłonnym, aby ułatwić pomiar poboru pożywienia i gromadzenie kału w 10 i 15 tygodniu życia. Myszy aklimatyzowano do klatek 72 godziny przed pobraniem danych. Pomiary masy ciała i poboru jedzenia oraz zbieranie odchodów były wykonywane codziennie przez 4 dni. Energię na gram odchodów określono metodą kalorymetrii bombowej, jak opisano wcześniej (48, 49). Energia ta została zastosowana do kału i poboru pokarmu w celu określenia poboru i wydajności energii, a tym samym absorpcji kalorycznej. RMR. RMR określono za pomocą respirometrii, jak opisano wcześniej (19, 30, 46, 50). Krótko mówiąc, myszy umieszczono w kontrolowanych termicznie, hermetycznych komorach utrzymywanych w temperaturze termicznej (30 ° C), a zużycie tlenu i zawartość dwutlenku węgla w wypływającym powietrzu (przepływającym przy 300 ml / min, skorygowane do standardowej temperatury i ciśnienia) były nieustannie rejestrowane (Analizatory AEI, rejestrowane przy użyciu programu ADInstruments PowerLab z powiązanym oprogramowaniem Chart). Analizatory codziennie kalibrowano przy użyciu wapna sodowanego i gazu kalibracyjnego (Praxair). Aby określić wpływ leczenia. MSH na RMR, wyjściowe pomiary RMR wykonano rano i ponownie po południu po wstrzyknięciu ip. MSH. BP według radiotelemetrii. BP i częstość akcji serca oceniano za pomocą radiotelemetrycznych sond BP (DSI, model TA11PA-C10), z kaniulami wszczepionymi do tętnicy szyjnej wspólnej, jak opisano wcześniej (19). W skrócie, sondy wszczepiono pod znieczuleniem ketamina / ksylazyna i zwierzętom pozwolono na powrót do zdrowia przez co najmniej tydzień, zanim odnotowano 3 kolejne 24-godzinne okresy (linia podstawowa). Dane rejestrowano przez 30 sekund co 5 minut podczas okresu rejestracji i uśredniano w ciągu dni u osobnika przed dokonaniem porównań statystycznych między grupami. Składu ciała. Skład ciała określono za pomocą magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) (Bruker, LF90), jak opisano wcześniej (49-52). Obudźcie zwierzęta były lekko powściągliwe w poliwęglanowej probówce podczas 1-minutowego nagrywania, a następnie natychmiast umieszczano z powrotem w domowych klatkach. IHC. Tkankę mózgową stosowaną do IHC perfundowano 4% PFA i inkubowano w 30% sacharozie. Sekcje wieńcowe (40-.m) cięto przy użyciu zamrożonego mikrotomu sanki (American Optical Scientific Instruments), a pierwszorzędowe przeciwciała dodawano do swobodnie pływających skrawków w temperaturze 4 ° C przez noc. Po przemyciu x PBS, dodano przeciwciała drugorzędowe w temperaturze pokojowej przez godzinę. Barwienie p-STAT3 przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (53). Pokrótce, myszy głodzono przez noc i podano .g / g leptyny ip następnego dnia rano. Trzydzieści minut później myszy poddano perfuzji i mózgi podzielono jak opisano powyżej. Swobodnie pływające skrawki inkubowano z pierwszorzędowym przeciwciałem przez 72 godziny, a następnie inkubowano z drugorzędowym przeciwciałem przez godzinę. Wszystkie sekcje zostały zamontowane na szkiełkach mikroskopowych i oglądane za pomocą mikroskopu Nikon Labophot 2. Oznaczenie ilościowe przeprowadzono za pomocą ImageJ (NIH). Zastosowano następujące pierwszorzędowe przeciwciała: kurczę GFP (Aves Lab Inc., GFP-1010); ACTH (Harbour-UCLA Research and Education Institute); i p-STAT3 (Cell Signaling Technology; 9131S). Zastosowano następujące przeciwciała drugorzędowe: Alexa Fluor 488 kozie przeciw-kurze (Life Technologies, Thermo Fisher Scientific, A11039); Alexa Fluor 488 kozie anty-królik (Thermo Fisher Scientific, A11008); i Alexa Fluor 568 kozie anty-królik (Thermo Fisher Scientific, A11011). RYBA. Myszy poddano eutanazji i pobrano tkankę mózgową i zamrożono w 2-metylobutanie, a następnie w pożywce do osadzania (związek Tissue-Tek OCT, Sakura Finetek) i przechowywano w temperaturze <80 ° C. Następnie wycięto 10-. M przekroje wieńcowe przy użyciu kriostatu i poddano protokołowi RNAscope Multiplex FISH dla świeżo zamrożonej tkanki (Advanced Cell Diagnostics). W skrócie, sekcje wstępnie traktowano proteazą IV, a następnie hybrydyzacją z sondami docelowymi, które zawierały 20 sond oligonukleotydowych podwójnie Z dla określonego docelowego RNA (Agtr1a, 404001, AgRP, 400711 i POMC, 314081). [przypisy: apteka hygea zielona góra, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego, testy osobowości psychologia ] [hasła pokrewne: olej kokosowy wybielanie zębów, dieta po operacji ginekologicznej, uporczywy kaszel przyczyny ]