Skip to content

Angiotensynowe receptory AT1A na komórkach wyrażających receptory leptyny kontrolują spoczynkowy metabolizm ad 7

2 tygodnie ago

482 words

Ta funkcjonalna interakcja wydaje się być specyficzna dla kontroli RMR i dlatego może przyczynić się do rozwoju SLR. Przedstawione tu wyniki ilustrujące selektywny wpływ AT1A w neuronach AgRP na RMR, ale nie zachowania pokarmowe, również podnoszą intrygującą możliwość, że specyficzny podzbiór neuronów AgRP eksprymujących AT1A przyczynia się do kontroli RMR. W przeciwieństwie do tego sygnalizacja AT1A może nie działać w neuronach AgRP, które przyczyniają się do zachowania pokarmowego. Pożądane jest dalsze badanie każdej z tych nowych koncepcji. Metody Zwierzęta. Kolonie AT1ALepR-KO utrzymywano na podłożu C57BL / 6J przez powtarzalną hodowlę męskiej myszy wyrażającej rekombina-zę Cre pod kontrolą promotora Lepr (12) z żeńską myszką z miejscami loxP flankujących allel AT1a (JAX-016211; Laboratorium) (45). Kolonie AT1AAgRP-KO utrzymywano na podłożu C57BL / 6J przez powtarzalną hodowlę męskiej myszy eksprymującej rekombinazę Cre pod kontrolą promotora Agrp (JAX-012899; The Jackson Laboratory) z żeńską myszą z miejscami loxP flankujących allel AT1a. Eksperymenty przeprowadzono na myszach płci męskiej i żeńskiej w wieku 10-15 tygodni. Kontrole w ściółce były stosowane w całym teście i nie wykryto żadnych różnic dla żadnego punktu końcowego, gdy porównano kontrolne mioty z różnych genotypów (dodatkowe dane dla kontroli z miotu). Myszy trzymano w temperaturze 25 ° C w standardowym 12-godzinnym cyklu światła / 12-godzinnej ciemności z dostępem ad libitum do wody i standardowej karmy (18% kcal z tłuszczu; Teklad dieta 7013; Envigo) lub HFD (45% kcal z tłuszcz; Dieta OpenSource D12451; Research Diets Inc.). Hodowane samce myszy C57BL / 6J i db / db (JAX-000642) utrzymywane na tle C57BL / 6J otrzymano z The Jackson Laboratory. Myszy NZ44 krzyżowane wstecznie z tłem C57BL / 6J (pierwotnie wywodzącym się z projektu GENSAT na The Rockefeller University, Nowy Jork, Nowy Jork, USA) uzyskano z laboratorium Teresy Milner w Weill Cornell Medical College (Nowy Jork, Nowy Jork, USA) ) (11). Wewnątrzkomorowe dostarczanie ANG II. Myszy zaopatrzono w kaniulę icv (ALZET Brain Infusion Kit III) połączoną z osmotyczną minipompą (ALZET Model 1004) dla chronicznego podawania icV aCSF (Tocris; 3525) lub ANG II (5 ng / h; Sigma-Aldrich; A9525). . W znieczuleniu za pomocą ipetaminy / ksylazyny myszy umieszczono w ramie stereotaktycznej, minipompę umieszczono pod skórą, a kaniulę wszczepiono przy użyciu następujących współrzędnych: 1,1 mm z boku, 0,5 mm z ogona do bregma i 3,0 mm z brzusznej od powierzchnia czaszki. Kaniulę przymocowano do czaszki za pomocą Vetbond (3M) i cementu dentystycznego. Model soli DOCA. 50 mg peletki DOCA (Sigma-Aldrich) wszczepiono do jamy sc pod znieczuleniem izofluranem. Zwierzęta następnie pojedynczo przechowywano i dopuszczono dostęp ad libitum do standardowej karmy i wody z kranu i 0,15 M roztworu NaCl przez 3 tygodnie. Uderzenia mózgu. Myszy poddano eutanazji i zebrano mózgi, zamrożono w 2-metylobutanie, a następnie w pożywce do osadzania (związek Tussue-Tek OCT, Sakura Finetek) i przechowywano w temperaturze <80 ° C. Przekroje wieńcowe (50. M) mózgu pocięto przy użyciu kriostatu, a mikropęchełki kory i SFO uzyskano stosując igłę 0,75 mm (Stoelting). Obustronne stemple PVN, ARC i SON zostały wykonane przy użyciu odpowiednio igieł 0,50 mm i 0,75 mm. Genomowy DNA izolowano przy użyciu zestawu AllPrep DNA / RNA Micro Kit (QIAGEN, katalog 80284), a rekombinację za pośrednictwem Cre badano metodą PCR stosując Taq Platinum (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific). Startery genów AT1a zaprojektowano do wytwarzania pasma 2,761 bp dla nienaruszonego genu AT1a lub pasma 309 bp dla rekombinowanego fragmentu, z powodu wycięcia eksonu 3, jak opisano wcześniej (46). Całkowity RNA wyizolowano z dziurkaczy mózgu przez ekstrakcję TRIzol (Thermo Fisher Scientific), a cDNA wytworzono przy użyciu odwrotnej transkryptazy SuperScript III (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific). Ilościowy PCR w czasie rzeczywistym dla myszy Pomc, Agrp, Gad1, Gad2, Vgat i aktyny przeprowadzono stosując TaqMan Gene Expression Assays (Life Technologies, Thermo Fisher Scientific, Mm00435874_m1, Mm00475829_g1, Mm04207432_g1, Mm00484623_m1 i Mm00494138_m1, odpowiednio) i gen poziomy ekspresji porównywano za pomocą metody Livak (47). Nagrywanie SNA. Współczulne nerwy BAT rejestrowano w znieczuleniu a-chlorofilozą, jak opisano wcześniej (15, 30). Pokrótce, zwierzęta znieczulono i oprzyrządowano je sondą do pomiaru temperatury okrężnicy. Kaniule zostały wszczepione do tętnicy szyjnej wspólnej (by zarejestrować BP) i żyły szyjnej (do IV [hasła pokrewne: czy można żyć bez trzustki, pzhgp nowa sól, zerwanie więzadła krzyżowego przedniego ] [przypisy: jak dobrze wypaść na rozmowie o pracę, szpital okulistyczny poznań, nie radzę sobie z emocjami ]